项目来源：2015年度大庆市指导性科技计划项目 合同号szd-2015-65 简要技术说明： 1、本研究主要是对线性探针法与传统药敏法筛查耐多药肺结核符合性研究。目前结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）耐药性主要靠细菌学检查（培养与药物敏感试验），但是受到结核分枝杆菌生长缓慢的制约，培养时间太长，整个培养、加上药物敏感试验时间最快也要两个多月，致使实验室MTB耐药性检测一直处于被动状态，不能及时有效指导临床治疗的同时也加大了耐药病原菌传播的机会。今采用的线性探针法用于快速筛查耐多药肺结核（MDR-TB），是一种分子生物学检测，是当今世界上最先进的检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）耐药性的方法，可以对利福平和异烟肼耐药的肺结核病人快速检测出来，只需要2天时间，实现了MTB耐药性的快速诊断，让患者得到及时科学治疗。 2、试验主要在研究标本中提取结核分枝杆菌核酸DNA、用生物素标记的引物进行多重PCR扩增和反向杂交。通过检测rpoB基因突变（编码RNA聚合酶B-亚单位）确定试验菌株对利福平的耐药性；通过检测katG基因（编码过氧化氢酶）确定试验菌株对高水平异烟肼的耐药性；通过inhA基因的启动子区（编码NADH烯酰酸性磷酸酶还原酶）确定试验菌株对低水平异烟肼的耐药性。 3、研究结果 1）、在对86份结核分枝杆菌涂阳标本检测中，其中线性探针法、传统药敏法对利福平单耐药符合率为95.6%（21/22）；对异烟肼单耐药符合率为100%（28/28）；同时耐药符合率100%（11/11） 2）、在对30份阳性培养物标本检测中，其中线性探针法、传统药敏法对利福平单耐药符合率为100%（7/7）；对异烟肼单耐药符合率为100%（8/8）；同时耐药符合率100%（5/5） 3）、结核分枝杆菌涂阳标本86份，培养阳性的84份，阳性符合率为：97.6%（84/86），线性探针法结核分枝杆菌检测条带阳性的86份，阳性符合率：100%（86/86）。 4）、传统药敏方法应该是检测耐多药的金标准，但是，检测时间太长。通过对线性探针法、传统药敏法检测利福平和异烟肼耐药符合性研究，耐药结果符合率达到了95.6%以上。线性探针法快速筛查耐多药肺结核，只需要2天时间。能够快速为临床提供耐多药肺结核的耐药检测结果，让患者得到及时科学治疗，意义非常大。 4、技术的创造性与先进性 本研究采用的线性探针法用于快速筛查耐多药肺结核（MDR-TB），是一种分子生物学检测，是当今世界上最先进的检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）耐药性的方法。与常规传统的培养及药敏比较，线性探针方法检测异烟肼和利福平耐药性是重大技术突破。 5、技术的成熟程度及安全性 我院分子生物实验室是市级重点学科，现具备开展此项目的所有条件，有严格的质量控制程序，可以投入临床使用。

大庆市第二医院

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