项目研究目标：探索Bcl-2基因修饰脂肪干细胞减少脂肪干细胞凋亡，提高脂肪干细胞的旁分泌功能。 主要研究内容： 1、Bcl-2基因转染ADSCs，探讨在体外缺血条件下对ADSCs凋亡的影响。2、Bcl-2基因转染ADSCs，探讨在体外缺血条件下对ADSCs旁分泌功能的影响。 技术关键及解决途径：1、ADSCs的分离培养 取人吸脂术抽吸物的脂质部分，使用酶消化法进行原代细胞培养及传代培养，观察细胞形态，取第3代细胞进行细胞表型鉴定。2、Bcl-2基因体外转染ADSCs:构建携带Bcl-2基因腺病毒载体，转染ADSCs。3、检测BCL-2基因转染的ADSCs的分化能力。用诱导分化实验评价Bcl-2基因转染的ADSCs的成脂、成骨、成软骨分化能力。4、 检验Bcl-2基因转染的ADSCs细胞数量倍增时间评价细胞增殖能力。5、Western Blot 实验检测Bcl-2基因转染后的蛋白表达6. ADSCs的凋亡检测：在缺氧缺糖(OGD)的情况下，通过TUNEL实验和Hoechst 33258染色验证Bcl-2-ADSCs的抗凋亡能力7. Bcl-2转染ADSCs后生长因子分泌检测在缺氧缺糖(OGD)的体外环境下采用酶联免疫吸附法（ELISA）评价Bcl-2转染的ADSCs分泌血管内皮生长因子（VEGF）, 肝细胞生长因子（HGF）, 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平。 项目创新点：在缺氧缺糖(OGD)的体外环境下，Bcl-2基因修饰脂肪干细胞是否能减少ADSCs凋亡，提高ADSCs的分泌多种生长因子的功能，从而为ADSCs成为理想的种子细胞和最终用于以细胞为基础的临床治疗提供前提和保障。 迄今为止，ADSCs成为非常有临床应用前景的干细胞，在细胞治疗领域具有广泛的应用价值。ADSCs在细胞治疗中一方面通过作为组织特异性祖细胞发挥作用，另一方面在于其旁分泌功能。提高ADSCs的成活率，促进和支持ADSCs分泌各种生物因子，模拟体内微环境的细胞外基质以及促进血管的再生和重建等均将成为研究热点，从而为ADSCs成为理想的种子细胞和最终用于以细胞为基础的临床治疗提供前提和保障。本研究具有潜在的巨大社会经济效益。

大庆油田总医院

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