本发明的目的是克服现有含水蛭或地龙药材的中药制剂细胞保护生物活性测定方法的不足，提供一种新的体外生物活性检测方法，以控制产品的质量或可进一步分离并纯化有效物质。 本发明提供的测定含水蛭或地龙药材的中药制剂细胞保护生物活性测定方法，主要包括以下步骤： （1）配制制剂供试品溶液：对于注射剂，可直接取注射液作为供试品溶液，注射用粉针剂可以采用无菌生理盐水溶解后作为供试品溶液，固体制剂可以采用适当方法提取活性成分后，用水、生理盐水或缓冲液溶解后无菌过滤作为供试品溶液。 （2）细胞培养：采用细胞培养皿或细胞瓶培养细胞，当达到90-95%的覆合度时，传代培养。 （3）供试品激活并制备细胞裂解液：传代细胞达到80-90%覆合度后，采用无血清培养基培养。使用含供试品的无血清培养基激活细胞5~20min后，洗涤并裂解细胞。将细胞裂解液离心取上清，进行蛋白定量测定。 （4）蛋白电泳-免疫印迹分析：按常规操作，使用ECL试剂检测信号，并定量。 所述步骤（1）中固体制剂的供试品配制方法为精密称取固体制剂0.1~10g，采用水、生理盐水或甲醇、乙醇溶液提取，提取方式可以采用浸泡、加热提取或超声提取，提取液减压浓缩至干燥，用水、生理盐水或Tris缓冲液溶解后作为供试品溶液。 所述步骤（2）中细胞培养器皿采用10cm直径的细胞培养皿，也可以采用细胞培养瓶。根据细胞类型不同传代时可用胰酶消化，也可以不用。细胞培养和传代具体条件可参考ATCC相关培养说明。 所述步骤（4）中ECL试剂盒检测信号定量的方法可以采用对纤维素膜上的信号进行光敏胶片显影，然后对显色条带的灰度进行扫描积分获得。也可以采用凝胶成像分析仪等设备进行积分定量。以不含供试药品的溶剂对照所得信号值为V1，供试品所得的信号值为V2，则细胞保护生物活性可以相关激酶激活上调率表示： 细胞保护活性（%）= （V2-V1)/V1*100% 该专利是疏血通注射液产品细胞保护活性的检测标准，通过检测ERK激酶所在信号传导通路的激活反映该中药制剂的细胞保护生物活性，所检测的蛋白分子包括EGFR和/或Src和/或Akt，该项专利技术突破传统质控模式，在保证产品质量的同时，提高产品药用活性的筛查标准，且方法简单、直观、可重现。 该成果已成功转化成疏血通注射液产品细胞保护活性的检测标准。

牡丹江友搏药业有限责任公司

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