《中国药典》自2005年版开始要求每个品种微生物限度检查方法必须经过验证实验确立具体的检验方法。 根据《中国药典》的要求。 本课题对100余种中成药的微生物限度检查方法，进行了反复多次的验证试验与研究，结合不同药物其自身的特性，建立相应的微生物限度检查方法。从而使检验结果更加科学、准确、可靠。虽然《中国药典》从1995年版起就收载了微生物限度检查方法，但在如何保证检验方法的科学性和检验结果的准确性方面还有一定差距。其关键是历版《中国药典》微生物限度检查方法未强调对检验方法进行必要的方法学验证。自《中国药典》2005年版起,明确规定企业生产的药品无微生物限度检查方法验证资料,不能报批、不许经营与销售。为了贯彻药典的要求，帮助企业解决实际困难，自2005年起开始了本项目的建立与实验。微生物限度检查方法验证是为确保所采用的方法适合于供试品细菌、霉菌(酵母菌)数及控制菌的测定.当供试品有抑菌活性时,应采取相应的方法消除供试液的抑菌活性后,再依法检查,确定适合供试品自身的供试液制备方法。不同企业生产的同一品种，特别是中成药，由于生产原料的来源、工艺、辅料不同，药品可能表现出不同的抑菌性，由于供试品抑菌成分的影响，导致许多样品呈现假阴性的结果，从而严重影响了检验结果的准确性。同一企业生产的相同品种，因原料来源不同、工艺改变和不同实验室等原因。也可能导致检验结果的差异。因此对不同企业生产的相同品种的 微生物限度检查方法进行方法学验证是非常必要的。而且按照药典的要求是势在必行的。 项目主要研究内容及技术指标 1、根据每一品种对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌三种试验菌的回收率是否大于70%，确定该品种的细菌数测定供试液的制备方法。 2、根据每一品种对白色念珠菌、黑曲霉菌二种试验菌的回收率是否大于70%，确定该品种的霉菌及酵母菌数测定供试液的制备方法。 3、根据不同品种、不同剂型接种其相应阴性菌及阳性菌的所得到的结果，确定该品种控制菌测定供试液的制备方法。 4、对每一品种的测定方法要进行三次平行试验，以确定该方法的正确、有效。 国内外同类研究现状和发展趋势 本项目100余种中成药中有70余种在微生物方法学验证方面在国内外尚属空白，其余70余种在国内外尚无确定的方法。针对中成药确立每一单独品种的微生物限度检验方法势在必行。 方法和技术 1、根据不同中药的品种对其化学成分进行研究、区分有抑菌性的化学成分，研究典型中成药的配伍及药理作用。 2、根据所积累的经验对样品的成分进行分析，确立试验方案。 3、通过多次试验对各种试验菌的回收率逐一进行验证。初步确立每一品种具体的检验方法。 4、对该方法进行三次独立的平行实验，分别计算各种试验菌的回收率 5、根据结果分析确定该品种的微生物限度检查方法。 2005年12月：成立科研小组，成员为齐齐哈尔市食品药品检验所生测室从事微生物限度检查的一线检验人员组成。 2006年：进行试验菌的购买、试验菌的复苏、传代，及菌液制备的试验与经验积累，根据不同中药的品种对其化学成分进行研究、区分有抑菌性的化学成分，研究典型中成药的配伍及药理作用。 项目实施后达到的主要指标 1、技术指标 每一品种通过方法的筛选确立对三种试验菌的回收率均大 70%，的供试液的制备方法。 每一品种通过方法的筛选确立对两种试验菌的回收率均大于70%，的供试液的制备方法。 通过方法的筛选确立各品种控制菌测定供试液的制备方法。对每一品种的测定方法所进行的三次平行试验，重复性很好。 2、市场情况及社会效益 本方法的确立可以为下一版药典每一品种实现微生物限度检查方法的各论化提供实验数据及科学依据；为中成药提供科学合理的微生物限度检查法；为人民用上安全卫生的放心药提供科学的、真实的检验数据。

齐齐哈尔市食品药品检验检测中心

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