本项目以双水相浮选体系分离纯化α-LA和β-LG为研究对象，考察影响双水相形成的因素以及蛋白质在体系中的浮选行为。特别考察成相物质的组成对分相能力的影响、不同蛋白质在双水相体系中的分配行为和分配机理以及分相无机盐的种类、盐的浓度、试液pH、表面活性剂、干扰成分、浮选时间和氮气流速等因素对双水相浮选效果的影响，确定影响浮选效率和选择性的主要因素。利用该体系分离纯化α-LA和β-LG，建立一种适用于α-LA和β-LG生产制备的双水相浮选技术，以期为建立高效、低成本的乳蛋白分离产业化技术提供参考。同时对其分离机理进行初步研究，初步阐释双水相浮选体系对蛋白质的浮选机理，为进一步研究蛋白质及其他生物活性物质的分离纯化方法、扩大双水相浮选技术的应用范围提供科学依据和参考。 （1）UCON/KH2PO4双水相浮选体系分离乳清中α-La的最佳浮选条件为：35 mL浓度为0.18 g/mL的KH2PO4溶液，其中包含10%（v/v）乳清溶液、50 ppm消泡剂和2 g/35mL NaCl，5 mL浓度为40%（w/w）的UCON溶液，反应时间为2 min，通气流速为30 mL/min，浮选时间为20 min。在最佳浮选条件下，乳清中的α-La被分离到上相，β-Lg保留在下相，得到α-La的浮选效率为95.67±1.04%。 （2）PEG 1000/柠檬酸钠双水相浮选体系分离纯化乳清中α-La的最佳浮选条件为：35 mL pH=8.20、浓度为0.40 g/mL的柠檬酸钠溶液，其中包含20%（v/v）乳清溶液和50 ppm消泡剂，5 mL浓度为50%（w/w）的PEG 1000溶液，通气流速为30 mL/min，浮选时间为42 min。在最佳浮选条件下，乳清中的α-La成功分离到聚合物PEG相，β-Lg仍留在下相，得到α-La的浮选效率和纯化倍数分别达到87.54±0.76%和5.33±0.05。

东北农业大学

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