抗菌肽具有广谱抗菌、无毒性、无耐药性、无残留与污染等优点，而且其热稳定性好，除氨基酸外无其他成分，不同于传统抗生素的作用机制，使其具有替代抗生素的巨大潜质。然而抗菌肽来源少、分离纯化困难、少数具有一定的毒副作用等，限制了抗菌肽的应用。本成果利用酵母表达系统，采用融合表达策略，重组分泌表达四种抗菌肽融合体系FAPs，确定了影响酵母重组表达抗菌肽效率的因素及其纯化技术，有效的发挥了四种抗菌肽的协同作用，降低了抗菌肽毒副作用。主要指标包括：（1）通过四种抗菌肽FAPs的融合串联方式，构建酵母重组表达载体，获得四种抗菌肽的融合基因；（2）通过对不同表达载体及宿主酵母细胞的筛选优化，获得了具有高表达量的高效重组酵母菌株A1，产率达到238.6 mg/L；（3）优化了发酵培养基，确定最佳的培养基成分及发酵条件：培养基（0.4%酵母提取物，0.04% CaSO4，0.36% MgSO4，1.2% (NH4)2SO4，0.7% KH2SO4，0.07% KOH， 4% (w/v) 甘油，pH=6），发酵罐发酵条件（甲醇加入量4ml/Lh，溶氧40%，培养60h）；（4）利用两步超滤法纯化获得表达上清中的融合抗菌肽FAPs，其回收率达及纯度达到90%以上；（5）重组抗菌肽FAPs显示了良好的协同效应，抑菌谱广，MIC在8-32 μg/ml范围内，较单一抗菌肽抑菌活性显著提高；（6）融合抗菌肽FAPs有效降低了抗菌肽的毒副作用，小鼠体内试验结果证明其无明显毒副作用，具有广阔的应用前景。 项目为抗菌肽的规模化廉价制备与最终在生产中的应用提供了重要的参考数据，项目成果对促进抗菌肽在农业、医药、畜牧、兽医、食品等多领域的产业化应用、解决抗生素残留及菌株耐药性等当前热点问题具有重要的理论和实用价值。

东北农业大学

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