（1）任务来源 该课题被列入2019年齐齐哈尔市科技局社会发展计划指导项目,项目编号为SFZD-2019145。 （2）应用领域和技术原理 本研究旨在探讨 miR-214在调控 Sox4表达并激活 PI3K/AKT通路调控骨折愈合过程。本实验研究将探究 miR-214、Sox4已经其产物以及 PI3K/AKT产物的表达结果，进行定量和定性分析，探究其 miR-214是否调控 Sox4表达，是否激活PI3K/AKT通路参与骨折愈合过程。大量研究已经证实参与骨折愈合的多种细胞因子，BMP超家族OPG-RANKL-RANK系统等具有更为广泛的修复与免疫方面的生理功能，既往研究证实 miR-214可通过抑制骨生成和刺激破骨细胞生成在哺乳动物的骨骼发育中发挥作用，在骨质疏松症患者的骨组织中 microRNA-214（miR-214）的表达异常升高，提示其在骨形成中具有独特的作用。 （3）性能指标 我们在前期研究中发现骨质疏松患者血清中 Sox4RNA含量明显高于对照组，然而其骨质疏松组血清中microRNA-214表达对照组略低，提示 miR-214与 Sox4两者与骨折愈合有着一定关联。从而开发骨折不愈合新的治疗途径, 降低骨折不愈合的发病 率、复发率及致残率。 （4）与国内外同类技术比较 国外学者很早就发现Sox6其实是miR-214下的一个重要调控靶基因，并且miR-214将会对Sox6产生一定的负向调控作用，反而言之，Sox6也可以降低miR-214对于机体内部细胞活力基因以及成骨基因的影响。并且，miR-214的感染行为将会进一步提高PI3K以及AKt的基础性磷酸化水平，但是如果向其中加入PI3K抑制剂，那么上述影响效果将会逐渐降低。MiRNAS对于机体内部细胞信号传导以及生物过程将会产生影响，而最终的影响效果将会由互补靶基因的变化情况而决定。本次研究采用的观察以及检测方法为“荧光质粒检测”，通过最终得出的荧光质粒检测报告来看，Sox6其实是miR-214中的一个靶基因。在既往研究成果中提到，Sox6其实是Sox结构域中的一个重要组成部分，在正常情况下，Sox6在人体内部的主要作用进行进行细胞增值以及凋零。现已经证实，机体内Sox6对于细胞增殖以及凋零的作用可以通过调整p53和P21实现。并且在最近一段时间内也有部分研究学者提出，Sox6对于人体大肠癌细胞具有一定作用，作用机制基本相同。从此角度来看，本文预测miR-214对于成骨细胞的抑制以及增值效果主要是依赖于Sox6实现。综合多方面研究成果，并且考虑到成骨细胞所存在的重要作用，本文认识miR-214就是通过调节Sox6从而引骨质进行愈合。国内对miR-214影响骨折不愈合的研究和应用还比较少，技术上还比较落后，应更加积极的参与实验研究中，并在临床应用中不断完善和评定其积极意义。 （5）成果的创造性、先进性 通过研究我们可以发现，Sox4其实是miR-214下的一个重要调控靶基因，并且miR-214将会对Sox4产生一定的负向调控作用，反而言之，Sox6也可以降低miR-214对于机体内部细胞活力基因以及成骨基因的影响。并且，miR-214的感染行为将会进一步提高PI3K以及AKt的基础性磷酸化水平，但是如果向其中加入PI3K抑制剂，那么上述影响效果将会逐渐降低。还有部分研究成果提到，PI3K/AKT通路将会参与到蛋白质的调节中，调节的蛋白家族为“Bcl-2”。其实，AKt是上述蛋白家族中的一个重要组成部分，位于整个结构域的上游，主要作用是进行型号传递，同时，如果该蛋白进行磷酸化则可以增加细胞增值通路，这也是PI3K/AKT可以控制细胞增值与凋亡的主要原因。本次研究中证明，miR-214 mimics可以激活PI3K/AKT的信号通路，从而引起Bax以及Bcl-2数量的变化，最终二者比例将会下降从而产生凋亡抑制效果。在之前的研究中还发现，生长影子TGF-β2可以通过作用PI3K/AKT从而完成Collal的诱导表达。同时，PI3K的激活是成骨因子生长的必须条件之一。TWIST其实是一个基本螺旋转录因子，其与癌症患者对于药物抗性反映情况有关，当机体内TWIST数量较高时候，患者对于化疗的不良反应将会加剧。目前来看，PI3K/AKT在骨折中将会起到重要作用，因为TWIST可以进一步控制Runx2，从而调控骨的形成。总体而言，miR-214可以通过活化PI3K/AKT的形式进一步加速机体骨骼愈合效果。 （6）作用意义 骨折患者不愈合导致肢体的致残率非常高，严重危害人类生命健康。在全国乃至世界对于治疗患者骨折不愈合的治疗费用极高，致残后患者需要社会及家庭的看护，为家庭及社会带来极大的负担。因此，探讨骨折不愈合调控机制具有重大意义。研究为构建以 miR-214基因的骨折不愈合干预治疗策略提供理论依据和实验基础，对开发骨折不愈合新的治疗途径具有积极意义。降低骨折不愈合的致残率，将为家庭及社会带来巨大的经济效益。本研究推广后，将应用到骨缺损的临床手术治疗中，将吸引了大量患者，减少病员因外省市流动而产生的交通、生活及治疗所需费用，同时增加医院和本市的经济收入。

齐齐哈尔医学院附属第三医院

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