（一）任务来源 该项目被列入2017年齐齐哈尔市科技局社会发展计划指导项目。SFZD-2017027 （二）应用领域和技术原理 氟牙症是由于外界环境中氟进入人体过多，从而引起牙釉质出现白垩、缺损以及着色变化等表现的疾病，近几年来，随着基因多态性的研究不断增多，人们对疾病的发病机制的研究也进入了新的领域，国外学者Vieira等研究发现遗传因素对氟牙症的影响，国内学者黄辉等研究了COLIA2基因多态性在氟牙发生发展中的作用，刘静波等研究发现FokⅠ基因多态性与肺癌有相关关系。国外学者发现FokⅠ基因多态性可以解释白血病的遗传易感性，还有学者认为会影响到白血病细胞的分化。因此氟牙症乃至其他疾病与基因之间的关系得到了学者的关注，相信其会有很好的前景。 提取空腹静脉血的标本，并按照说明书的要求提取基因组的DNA。通过检索维生素D受体基因的资料，从美国国家生物技术信息中心内gene bank中得到维生素受体基因的DNA序列。FokⅠ位点引物序列：上游5'ACTGACTCTGGCTCTGAC3'，下游5'CACCTTGCTTCTTCTCCC3'，预期产物片段246bp。PCR 扩增反应体系为50μL。PCR 扩增条件为94℃预变性5min,循环条件为94℃ 50s，55℃ 50s，72℃ 60s，循环5次，然后94℃ 50s，60℃ 50s，72℃ 60s，循环25次，72℃末端延伸7min。加入PCR产物,混匀，反应产物经凝胶电泳,染色，借助紫外灯来观察产生的反应，并根据电泳条带数和位置，来判断胶原基因类型。 （三）性能指标 PCR 产物的纯化，采用普通DNA 产物纯化试剂盒(DP204-03)对PCR 产物进行纯化。通过随机抽取10%的样本重复以上内容，从而使结果更具可信。 （四）与国内外同类技术比较 目前VDR 基因多态性与骨相关疾病以及慢性疾病的研究结论没有一致的结果，这与性别、年龄、民族、受试人种、样本量、环境影响等多种因素相关。而VDR FokⅠ基因多态性与儿童氟斑牙之间的关系尚未有人研究，可以通过研究 VDR多态性，探讨其与氟暴露地区的氟斑牙发病率之间的关系。 （五）成果的创造性、先进性 研究中，我们获得了关于健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因FokⅠ的分布特点，发现两组儿童FokⅠ多态性分布差异有统计学意义（P<0.05）。因此我们能够推断健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因分布有差异，即与氟牙症之间有关联。进一步分析发现在氟牙症儿童和健康儿童中，FF基因型和ff基因型分布均存在显著差异，Ff基因型不存在显著差异，因此FF基因型和ff基因型和氟牙症的发生有相关性，提示可以通过检测FF基因性和ff基因型来对氟牙症高危人群进行筛选。通过对维生素D受体FokⅠ基因多态性和氟牙症发病之间的关系分析发现，携带FF基因型的儿童发生氟牙症的风险OR值为增高，等位基因中，F基因型的儿童发生氟牙症的风险增高，即F基因型也许是氟牙症的易感基因之一。 （六）作用意义 氟斑牙（dental fluorosis）为色素牙中的一种病变类型，牙齿呈黄色，是慢性氟中毒早期口腔表现。该病症具有区域性特征，我国东北地区多发。控制氟元素的来源，降低氟化物的摄入，是预防地方性氟中毒的主要办法。通过研究分析维生素D 受体FokⅠ与基因多态性在儿童氟斑牙发病率之间是否存在关系，为以后氟牙症的研究和精准医疗奠定基础。 （七）推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见 研究中，我们获得了关于健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因FokⅠ的分布特点，发现两组儿童FokⅠ多态性分布差异有统计学意义（P<0.05）。因此我们能够推断健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因分布有差异，即与氟牙症之间有关联。 存在问题：本项目应用的实验中，实验失败的主要原因是核糖核酸（RNA酶）的污染。 改进意见：一方面严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。一定要严格的无菌操作，保证实验顺利完成。

齐齐哈尔医学院附属第三医院

该项目为储备库项目资源，暂无效益分析内容。