（一）任务来源： 该课题被列入2017年齐齐哈尔市科技局社会发展计划指导项目。 （二） 应用领域和技术原理： 1、应用领域：该课题的研究领域为临床医学-肿瘤诊断与治疗。 2、技术原理：（1）药物与试剂：①吉西他滨（泽菲，国药准字H20030104，生产厂家：江苏豪森药业股份有限公司）；②10%胎牛血清1640培养基（南京迪安生物科技有限公司）；③免疫组化试剂盒购买于武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司（Elabscience Biotechnology Co.,Ltd）。（2）细胞培养：取人正常肺细胞与非小细胞肺癌细胞进行吉西他滨药物处理后，在10%胎牛血清1640培养基中进行培养，温度保持在37℃，培养基放置于饱和湿度的培养箱中，细胞贴壁生长，以XXX胰酶及XXXEDTA（1：1）消化传代，用于试验的细胞均处在指数生长期。（3）测定方法：质粒构建与抗体：测定SIRT7和β-肌动蛋白mRNA水平，细胞在裂解缓冲液中裂解细胞并离心分离，细胞裂解液经SDS-PAGE分离。初级抗体孵育过夜后，应用第二抗体，最后进行免疫荧光染色。分析SIRT7在人非小细胞肺癌中的表达及对于吉西他滨治疗的反应。 （三）性能指标： SIRT7在人非小细胞肺癌中高表达，而非小细胞肺癌H157细胞的自噬激活吉西他滨是SIRT7依赖。SIRT7对于吉西他滨治疗的反应上调，且SIRT7的衰竭使细胞对吉西他滨诱导细胞死亡的敏感，试验证明SIRT7的耗竭阻止自噬，在H157细胞对吉西他滨的反应诱导细胞死亡的结果。 （四）与国内外同类技术比较： 非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌总数的85%，NSCLC的治疗多以铂类为基础的化疗为主。吉西他滨为基础的化疗被证明是临床研究中最活跃的也是最标准的对于非小细胞肺癌的治疗。然而，无论是先天性或获得性的吉西他滨耐药，限制了其治疗效果。吉西他滨耐药的潜在机制尚不完全清楚。最近研究表明，通过上调不同肿瘤细胞的自噬水平，可以提高对化疗的抗肿瘤能力。此外，自噬抑制增强了抗癌药物在肿瘤细胞系和临床前模型中的细胞毒性和敏感性。此外，有报道称自噬参与了吉西他滨诱导的A549肺癌细胞死亡。这些结果提示自噬抑制可能是NSCLC预防化疗耐药的有效策略。本研究发现SIRT7在人非小细胞肺癌中高表达，而非小细胞肺癌H157细胞的自噬激活吉西他滨是SIRT7依赖。SIRT7对于吉西他滨治疗的反应上调，且SIRT7的衰竭使细胞对吉西他滨诱导细胞死亡的敏感，试验证明SIRT7的耗竭阻止自噬，在H157细胞对吉西他滨的反应诱导细胞死亡的结果。 （五）成果的创造性、先进性： SIRT7是唯一分布在核仁的sirtuin和经常过度表达在许多肿瘤SIRT7针对Pol I有转录调节因子的功能，同时作为乙酰H3K18ac的癌基因。SIRT7作为一种新兴的代谢调节和肿瘤标记物。在抗肿瘤和癌症治疗中SIRT7功能尚未阐明。该课题研究结果可知SIRT7在人非小细胞肺癌中高表达，而非小细胞肺癌H157细胞的自噬激活吉西他滨是SIRT7依赖。SIRT7对于吉西他滨治疗的反应上调，且SIRT7的衰竭使细胞对吉西他滨诱导细胞死亡的敏感，试验证明SIRT7的耗竭阻止自噬，在H157细胞对吉西他滨的反应诱导细胞死亡的结果。 （六）作用意义： 由肺癌患者呈逐年增加趋势，本研究能够改善肺癌患者治疗效果，减小患者的治疗成本，本研究能够扩大我院的患者源，具有一定的直接经济效益，同时本研究能够扩大我院在本地区，乃至全国的知名度级影响力，能为我院带来一定的间接经济效益。通过实验可以明确吉西他滨耐药机制，从而研发新的药物使化疗效果更加理想，延长患者生存时间及生存治疗，减轻社会及家庭经济负担。本研究具有较大的市场效益，同时本研究能够改善肺癌患者治疗期间生活质量及其预后，具有一定的社会效益。 （七）推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见。 近几年，肺癌的发病率逐年升高，其中非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌总数的85%，而在临床上，NSCLC的治疗多以铂类为基础的化疗为主。吉西他滨为基础的化疗被证明是临床研究中最活跃的也是最标准的对于非小细胞肺癌的治疗。然而，随着它的使用，无论是先天性或获得性的吉西他滨耐药，限制了其治疗效果。SIRT7的上调对吉西他滨治疗诱导的自噬，从而防止非小细胞肺癌H157细胞死亡，在细胞的耗竭使SIRT7 H157细胞容易死亡,由于自噬减少针对吉西他滨耐药.我们的结果披露在非小细胞肺癌化疗的耐药由SIRT7作用诱导自噬，这表明SIRT7是肿瘤抗代谢疗法一个电位的治疗目标。 存在问题：1、SIRT7的调节器Mybbp1a可抑制SIRT7脱乙酰化物酶的活性，其作用机制尚需要进一步阐明。2、SIRT7的衰竭使细胞对吉西他滨诱导细胞死亡的敏感，试验证明SIRT7的耗竭阻止自噬，其作用机制尚不明确。 改进意见：完善实验方案设计，深化本研究方案，深入进行本研究。

齐齐哈尔医学院附属第三医院

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