牛轮状病毒属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，是引起犊牛腹泻的主要病原之一。牛轮状病毒主要感染15-45日龄的犊牛，发病早期表现为精神沉郁、流涎、腹泻，若不及时治疗，病牛可发生脱水、体温下降，极易继发细菌感染，并导致死亡。给我国养牛业带来严重危害和巨大的经济损失。因此，建立敏感性强、特异性高的快速检测方法对诊断和防控牛轮状病毒病具有重要的实践意义。目前，我国对牛轮状病毒病的经典检测方法是电镜技术、分离培养、免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、核酸电泳法、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）等。电镜技术要求样品中RV达到一定数量才能检测到，并且要求具备特殊设备和专业技术人才，基层单位普及困难，应用受到限制。体外分离培养RV难度大、周期长，多数RV需要经过胰蛋白酶及胰凝乳酶等蛋白水解酶处理后才能适应细胞生长。因此，该方法局限性较大，且不利于大规模检测。免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、核酸电泳法、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）等方法检测病原，对仪器和设备的要求较高，只适用于实验室检测，不适于现地检测。本研究通过获得BRV多克隆抗体和单克隆抗体腹水，结合胶体金免疫层析技术制备成胶体金免疫层析快速诊断试纸条。胶体金免疫层析试纸条具有简单快速、结果清晰的特点，无需复杂的操作技巧和特殊设备，且成本低、携带方便，为BRV的快速诊断提供了一种敏感、特异的现地检测方法，对BRV的综合防控具有重要的实践意义。以纯化BRV VP6单抗作为金标抗体，纯化兔抗BRV多抗为捕获抗体包被检测线，山羊抗鼠IgG二抗包被质控线，建立了检测牛轮状病毒的胶体金免疫层析试纸条。本研究建立的免疫胶体金层析试纸条具有良好的特异性和稳定性，且敏感性高，可重复性好，检测速度快，适用于牛轮状病毒感染的快速诊断，并用于基层组织的现地检测。

东北农业大学

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