一.确定细胞色素P4503A亚家族内含子10中的SNP。（rs2242480）对应的卡马西平及环氧化卡马西平血药浓度。二.明确细胞色素P4503A亚家族内含子10中的SNP，（rs2242480）对卡马西平及环氧化卡马西平血药浓度的影响，证明细胞色素P4503A亚家族内含子10中的SNP（rs2242480）与卡马西平的代谢有关。三.建立根据癫痫患者基因型选择卡马西平用药剂量的体系。从而形成临床患者个体化用药模式。同时发表了国家级论文《大医生》杂志一篇、还发表了省级杂志《饮食保健》期刊一篇、获得2018年哈尔滨市医疗卫生新技术引进应用奖三等奖。 成果突破以往实践中应用的情况及效果，P4503A基因存在较多变异，且不同地区、不同种族亦不相同，与环境因素有一定关系。临床发现其发生与药物的起始剂量、加量速度、药物剂型、合用药物等诸多外界因素有一定的关系。如果起始剂量较大，加量速度较快，则相对更容易发生不良反应，病情相对更严重;因此通过本实验，在临床应用卡马西平时常规监测卡马西平及环氧化卡马西平血药浓度，为临床用药提供科学性和合理性。但目前当上述机制尚未完全清楚时对于慢代谢型的基因患者必须减少用药剂量，并密切观察卡马西平及环氧化卡马西平血药浓度和症状的变化。必要时考虑选用与P4503A代谢无关的抗癫痫药治疗。常规药物浓度监测应在体内药物浓度达到稳态时，抽取下次服药前的血液进行。因此，患者需事先服药若干时间，才能使体内药物浓度达到稳态。由于监测的结果是用药后的药物浓度情况，所以，药物浓度监测具有滞后性，事先无法预测患者的结果。下一步如果能证明P4503A基因型与卡马西平发生不良反应相关，那么通过检测癫痫患者P4503A的基因型，就可预测卡马西平及环氧化卡马西平在体内血药浓度的变化，从而找到属于患者自己的卡马西平剂量，减少患者用药的危险性。今后应扩大样本量并进行多个位点的深入研究.进一步证实基因多态性可能是个体用药反应差异的遗传学基础。课题应用DNA提取，PCR扩增，SSCP_PCR，HPLC等实验技术将测定的卡马西平和环氧化卡马西平血药浓度与细胞色素P4503A亚家族不同的基因型进行统计学分析，比较了不同基因型间血药浓度的差异。证明细胞色素P4503A家族为卡马西平在人体内的主要限速酶，提出应根据细胞色素P4503A亚家族基因突变型选择卡马西平用药剂量，为提供癫痫的合理化用药提供依据。将临床用药测定血药浓度与基因多态性的研究有机结合，使临床工作更具科学性和合理性；从药物遗传学的角度解释临床上卡马西平对不同个体反应性的不同；根据CYP3A4基因突变型选择用药剂量，解决卡马西平在临床使用时有的病人疗效不佳、副作用大等问题。证明中国人的CYP3A4酶与卡马西平代谢有关，在国际上首次报道CYP3A4基因多态性与卡马西平和环氧化卡马西平血药浓度的关系，提出卡马西平临床用药应以CYP3A4基因突变特点为基础，以增强疗效减小副作用。首先，PCR-SSCP法确定不同癫痫病人的细胞色素P4503A亚家族基因型，包括野生型(未突变)、突变型。根据细胞色素P4503A亚家族基因型将患者分类为野生纯合子型、野生/突变杂合子型、突变基因纯合子型、突变/突变杂合子型。SSCP法检测突变位点相对准确，被广泛应用于检测各种点突变，短核苷酸序列的缺失或插入，是一种快速、简便、灵敏的突变检测方法。第二，HPLC法测定在患者服用CBZ达到稳态后的CBZ及其代谢产物CBZE的血药浓度。HPLC法选择性强，固定相种类较多，流动相通过改变其组成成分及比例，可以对CBZ和CBZE进行分离测定，并且使CBZE对CBZ的测定干扰及偏差减小。第三，统计学方法分析四类细胞色素P4503A亚家族基因型癫痫患者(野生纯合子型、野生/突变杂合子型、突变基因纯合子型、突变/突变杂合子型)分别对应的CBZ和CBZE血药浓度之间是否存在差异，比较其血药浓度的变化，判定四类癫痫患者分别哪类是强代谢者、中代谢者和弱代谢者。本次实验中，发现位于内含子10中的一个SNP（rs2242480），在对58例样本测序后发现2例突变基因纯合子（T/T），17例突变基因杂合子（C/T），39例野生型基因纯合子（C/C）。由于该等位基因位点发生的杂合与纯合突变都会导致其所编码的CYP3A4酶失活性，故称其携带者均为弱代谢者（M型），而等位基因纯合子携带者为快代谢者（w型），本组病例中，w型频率为67.24%（39例），M型频率为32.76%（19例）。但未发现外显子的突变，与以往报道相符。

哈尔滨市第四医院

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