1.课题来源与背景 本研究为黑龙江省卫生健康委员会计划项目。 流感是人类面临的主要公共健康问题之一，加强流感实时监测非常必要。 2.技术原理及性能指标 本研究采用MDCK细胞培养法分离病毒，获得哈尔滨市流感流行株，采用血凝抑制方法进行流感型别鉴定，通过分子生物学技术进行病毒基因组序列测定与同源性比较分析，构建HA、NA基因片段种属间系统进化树，对哈尔滨市流感流行株的型别、基因型特点及种系进化关系等从分子机制进行分析探讨，并针对国际疫苗推荐株对哈尔滨市普通人群的保护效果进行评估，对现在使用的流感治疗药物的耐药性进行分析。 本研究采集样品2055份，获得哈尔滨市2015年的流感流行优势株为H3N2型，并对13份H3N2型流感流行株进行基因序列测定，得到H3N2型流感病毒HA基因核苷酸序列的同源性为95.5%～100%，NA基因核苷酸序列的同源性为96.5%～100%，核苷酸序列均处于同一进化谱系中，且哈尔滨市H3N2型流感病毒HA、NA基因与相应年份疫苗株的同源性较高，未发现较大的变异，也没有发现特别有意义的耐药位点的改变和新的耐药位点的出现。 3.技术的创造性与先进性 经典的生物学只能从生物表型的变化描述和归纳生命活动的某些规律，分子生物学的兴起使整个生命科学的研究上升到一个全新的阶段，是从分子水平研究生物大分子的结构与功能，从而阐明生命现象本质的科学。序列比对让人们能够判断两个序列之间是否具有足够的相似性，从而判定二者之间是否具有同源性，这是质的判断。随着分子生物学技术的迅速发展，分子流行病学成为预防医学发展最快、最活跃的学科之一。从分子基因水平研究病因、流行因素及防治措施更特异、更敏感、更精确。 目前预防流感的最佳办法就是每年接种最新流感疫苗，从分子水平针对国际疫苗推荐株对人群的保护效果进行评估是分子生物学在计划免疫领域的较新应用。流感病毒的耐药性不断增强，抗病毒药物正面临挑战。通过本项研究，获得了哈尔滨地区流感流行毒株及其分子生物学特性和耐药性资料，为及时发现有意义的变异株、更新流感疫苗和流感临床治疗药物筛选提供科学数据、为流感流行尤其是大流行的预警提供依据，同时也为建立哈尔滨市流感病毒基因数据库，进行有意义的尝试。 4.技术的成熟程度，适用范围和安全性 本项目的技术已成熟，可以应用于所有流感分子特性及耐药性的研究中。 本研究仅以哈尔滨市为任务地区，研究成果仅应用于哈尔滨市，其他北方城市可做参考。哈尔滨是中国最北部省份的省会城市，是中国北方高寒地区的典型城市，本研究成果可作为中国北方高寒地区流感分子生物学研究的补充，为国内外流感研究提供中国北方高寒地区的资料。 本研究成果不仅对目前流感研究有科研资源的价值，而且也可为其他领域包括传染病管理方面的人员提供决策参考。应用于疾病预防控制中，可为制定流感防控方案提供依据，为流感大流行预警提供依据；应用于计划免疫工作中，通过评估流感疫苗接种的有效性，使适宜人群放心地进行疫苗接种，降低流感的发生率；应用于健康教育媒体宣传中，可减少高发时间流感给人们带来的恐慌，有利于社会的稳定和经济的发展；应用于临床治疗中，通过耐药结果，指导临床用药，以便及时有效地开展流感病人救治，减少重症病人病死率，减轻因流感引起的家庭和国家的经济负担。总之，本研究在流感疫情防控、疫苗研发、药物筛选、临床治疗等领域应用前景可观。 5.应用情况及存在的问题 本项研究已在哈尔滨市疾病预防控制中心流感病原学、分子生物学及耐药性监测等工作中应用。本项研究的应用，提升了哈尔滨市流感病毒的检测能力，为哈尔滨市有效防控流感疫情提供了先进的实验室检测技术，对哈尔滨市乃至黑龙江省流感病毒暴发疫情的预防及控制具有重要的实用价值。另外，在从容应对不明原因肺炎等病毒性疾病和突发公共卫生事件时，对及时明确病因，防止疫情蔓延提供了技术支持，社会经济效益显著。 流感病毒变异的可能性随时存在，病毒治疗的耐药愈发凸显，疫苗匹配刻不容缓。作为全国流感监测网络实验室，哈尔滨市疾控中心在流感病毒监测方面积累了大量数据，曾分离到数百株流感病毒，但由于病毒的基因测序分析工作刚刚开展，所积累的病毒分子基因水平相关数据有限。本课题研究是对哈尔滨地区流感流行优势株分子特性及耐药性的初步探索与科学理论的推断，哈尔滨地区流感防控还有许多未解的问题，今后将继续开展相关的研究。 6.历年获奖情况； 基于本课题申报的项目"基因测序技术在新甲型H1N1流感耐药性的应用" 获2016年新技术引进应用奖黑龙江省二等奖、哈尔滨市二等奖；"抗流感中药评价平台的建立"获2015年新技术引进应用奖哈尔滨市三等奖；"住院重症肺炎患者流行特征及病原谱调查" 获2015年新技术引进应用奖哈尔滨市三等奖。

哈尔滨市疾病预防控制中心

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