1、课题来源与背景 乳腺癌的发病率在我国呈逐年上升的趋势，化疗是治疗乳腺癌特别是晚期乳腺癌重要的手段之一，但肿瘤多药耐药性（multidrug resistance, MDR）一直是乳腺癌药物治疗失败的关键因素。尽管针对MDR的基础研究较多，但在临床上取得突破性的进展较少。CIAPIN1是一种新的凋亡调节分子，目前的研究已经显示出CIAPIN1具有广泛且重要的功能，特别是与恶性肿瘤的关系非常密切。近年来我们课题组对CIAPIN1基因在乳腺癌MDR中的作用进行了深入的研究，发现并证实CIAPIN1基因可以通过影响MDR1基因表达、细胞凋亡、细胞周期等途径实现对乳腺癌MDR的调控作用。而从基因转录，编码再到蛋白质发挥功效，许多调节因子起着至关重要的作用，微小RNA（miRNA）是一类非编码小RNA分子，它通过与mRNA配对引起其降解或翻译抑制而发挥作用。并且miRNA可以通过直接或间接作用于癌基因或抑癌基因参与包括促进或抑制肿瘤形成、转移、凋亡等多个方面。为了深入了解CIAPIN1基因在乳腺癌耐药表型形成中的作用机制并锁定其上游调控因子，我们以miRNA为切入点，研究可能参与CIAPIN1调控网络的因子，可以从更高水平展开乳腺癌耐药相关信号传导途径的研究，为乳腺癌耐药机制的阐述，以及新型治疗药物的研制，提供可靠的理论和实验依据。 2、研究目的与意义 本实验的结果将有利于我们深入地理解CIAPIN1调控乳腺癌耐药的作用机制，为评估乳腺癌的治疗效果并逆转乳腺癌的耐药提供新的作用靶点，为新型分子靶向药物的开发提供更为坚实的理论基础，力争实现细胞毒药物与基因治疗的有效结合，在乳腺癌内科治疗上实现新的突破，解决临床应用的实际问题，通过个体化治疗来提高疗效和减少副作用，为患者造福。 3、主要论点与论据 首先我们应用TargetScan数据库预测CIAPIN1 3′UTR区可能存在的种子结合位点的miRNA，结合相关文献对目标miRNA进行整合、分析，明确了本研究的目的miRNA：miRNA143，它可以通过种子区与CIAPIN1 3′UTR 373-380位点相结合。我们采用双荧光素酶报告基因检测系统来验证二者之间结构和功能上的靶向关系，成功构建了CIAPIN11基因3′UTR荧光素酶报告载体，检测显示转染miRNA-143模拟物的CIAPIN1 3′UTR野生型报告基因组双荧光素酶活性与空白对照组相比下调了约71%，有显著的统计学差异（P=0.0036）。转染miRNA-143抑制剂的CIAPIN1 3′UTR野生型报告基因组双荧光素酶活性与空白对照组相比，荧光素酶活性明显增加，上调了约38%，有统计学差异（P=0.0482）。这一结果证明CIAPIN1与miRNA143有结合位点，且miRNA143对CIAPIN1基因具有靶向调控作用。这为我们下一步研究miRNA143在乳腺癌MDR中的调控作用及寻找新的药物靶点提供了理论及实验室的基础。接下来我们成功构建了miRNA143重组慢病毒载体，并将miRNA143转染入乳腺癌耐药细胞株中，通过观察细胞株的变化来了解细胞耐药性的变化，在转染miRNA143的后的MCF-7，MDA-MB-231和MDA-MB-453耐药细胞株对紫杉醇的IC50值明显降低，增殖活性明显下降，且具有统计学差异，说明miRNA143可以逆转乳腺癌耐药细胞株的耐药性。另外通过Western blot检测结果显示miRNA143转染细胞株中的CIAPIN1蛋白表达量降低，进一步证实miRNA对CIAPIN1基因的负调控作用，通过下调CIAPIN1基因的表达可以克服乳腺癌细胞的耐药性。 4、创见与创新 （1）明确了miRNAs水平上CIAPIN1基因在乳腺癌MDR中的作用机制：丰富的前期工作提示CIAPIN1基因在乳腺癌多药耐药中发挥着重要作用，如今miRNAs已成为全球分子生物学一个研究重点，本课题跟踪国际热点，从miRNAs水平就“CIAPIN1基因对乳腺癌MDR的调控机制”这一问题进行了深入研究，这在国内外尚未见报道。 （2）采用了多项行之有效且适于临床应用的生物学技术：采用的双荧光素酶报告基因系统是一种快速、可重复的消除miRNA预测结果假阳性的有效工具，广泛用于miRNA与靶基因相互作用的结构学验证，技术方法成熟。慢病毒载体也是近年较为热点的一种基因载体，该载体系统转染效率高，我们将继续探讨这种载体的有效性，并为其应用于临床积累更多的实践经验。 （3）确定了新的逆转乳腺癌MDR的治疗靶点：利用慢病毒转染技术将miRNA143转染入乳腺癌耐药细胞株中，通过改变miRNA143的表达水平来逆转肿瘤细胞的耐药性，除了证实miRNA143是通过抑制CIAPIN1基因的表达来完成这一逆转过程的，更为我们找到新的逆转乳腺癌MDR的治疗靶点，提供了新的临床思路。 5、社会经济效益，存在的问题 目前临床上在逆转MDR研究中多采用普通的药物干预，但受到一些药物毒性的限制使其在临床实际应用中受到了很大的限制，肿瘤的生物靶向治疗越来越受重视。本研究着眼于乳腺癌MDR的分子机制，致力于发现新的生物靶点，不仅为确定新的、更适合临床运用的治疗靶点以解决临床上的肿瘤耐药问题提供理论支持，而且提出了基因靶向治疗与化疗联合应用逆转耐药的新思路，为实现乳腺癌患者的个体化治疗，避免过度治疗提供了新的思路。

哈尔滨医科大学附属第二医院

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