①课题来源与背景 人类基因组计划的完成，人们发现人类基因数目约为3.5万个。人类基因组计划在揭示基因组精细的同时，也凸现出基因数量有限和结构的相对稳定性，这与生命现象的复杂性和多变性之间存在着巨大反差。人们认识到，基因只是遗传信息的载体，要认识生命现象、阐述其活动规律，只了解基因的结构是远远不够的，有必要对生命活动的执行者——蛋白质进行更深刻理解。 在肿瘤的研究中，通过蛋白质组学的方法可以检测肿瘤组织蛋白质的数量、结构、性质、相互关系和生物学功能进行全面和深入的研究，进一步阐明肿瘤的发生、发展机理、找到各种异常表达的蛋白质，可以作为肿瘤诊断的标志物和筛选肿瘤治疗药物的靶点。 ②研究目的与意义； 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,其发病率高达10%。但目前乳腺癌尚缺乏高效特异的肿瘤标志物，作为乳腺癌诊断、随访及预后判断依据。基于不同类型乳腺癌全蛋白质组分析将有助于筛选血清肿瘤标志物，探索新的生物治疗、基因治疗靶点，研究转移、耐药机制。 本研究将采用蛋白质组学的研究方法，利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术，分离乳腺癌与正常腺体组织的总蛋白，建立乳腺癌与正常腺体组织的蛋白表达谱，利用图像分析软件，比较这两种组织中蛋白的表达差异，对差异表达蛋白进行质谱分析和Swiss-port数据库搜索，筛选乳腺癌肿瘤标志物。 ③主要论点与论据； 目前在乳腺癌肿瘤中，特异性肿瘤标志物的比较蛋白质组学研究尚不充分，仅有研究表明核增生抗原和膜蛋白HS90、pHS60在侵袭性癌中高表达，尚有待于完成临床肿瘤标志物的检测。本研究将采用蛋白质组学的研究方法，利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术，分离乳腺癌与正常腺体组织的总蛋白，建立乳腺癌与正常腺体组织的蛋白表达谱，利用图像分析软件，比较这两种组织中蛋白的表达差异，对差异表达蛋白进行质谱分析和Swiss-port数据库搜索，筛选乳腺癌肿瘤标志物。 2003-03在美国圣巴巴拉召开的“肿瘤标志物:从发现到应用”会议上，大会主席Herbert A 回顾总结了近年来生物技术发展对新的肿瘤标志物发现的作用时，认为2D电泳结合MS、高压液相分析(HPLC)、表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS), LCMS-MS等技术使人们可以从蛋白质水平分析潜在的肿瘤标志物，从而使新标志物的发现提升到一个更高的水平。应用差异蛋白质组学技术可以比较肿瘤和正常细胞之间的蛋白质组异同，从而发现肿瘤特异性蛋白，找到肿瘤标志物，这是近期研究中的热点. ④创见与创新； 本研究结合目前研究现状及前期研究成果，应用蛋白质组学的研究方法及最新研究成果，整体上研究乳腺癌蛋白质的差异表达，应用比较蛋白质组学的方法分析不同亚型的乳腺癌组织与正常腺体间蛋白质表达差异，建立乳腺癌组织蛋白质表达图谱。进而筛选乳腺癌患者血清中蛋白质谱，与乳腺癌组织蛋白质表达图谱进行比对，筛选乳腺癌特异的血清肿瘤标志物，作为乳腺癌诊断、预后评估指标。首次从蛋白质组学水平全面筛查了乳腺癌标志物。 ⑤社会经济效益，存在的问题； 近年来．蛋白质组学技术为寻找敏感性和特异性均较高的肿瘤标志物提供了一条新的途径。生命科学已进人后基因时代，人们从组织和细胞蛋白整体水平研究肿瘤成为可能。因此用蛋白质组学方法从整体上研究肿瘤地发病机制，寻找肿瘤诊断和预后的特异性标记以及药物治疗的靶标已成为近期研究的热点。应用蛋白质组学方法筛选出YKL-40与乳腺癌的发生密切相关。乳腺癌患者血清及组织标本中YKL-40表达水平与乳腺癌发病相关，可望成为乳腺癌新一代肿瘤标志物,通过进一步的深入研究，将有望广泛应用于临床，具有良好的应用前景和社会效益。 RNA干扰、激光共聚焦显微镜是近年出现新技术，本课题组应用经验尚有限，我们将在中心实验室经验丰富的专职技术人员和显微镜厂家代表的指导下完成工作，保证实验质量。研究处于初级阶段，有待于进一步的深入研究。 ⑥历年获奖情况； 获得黑龙江省卫生厅新技术应用奖三项。 ⑦成果简介 SCI论文 1、High YKL-40 Serum Concentration Is Correlated with Prognosis of Chinese Patients with Breast Cancer.PLOS one.December2012/Volume 7/Issue 12/e51127.

哈尔滨医科大学附属第四医院

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