课题来源与背景、研究目的和意义 急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）病情十分凶险，早期死亡率高。随着亚砷酸（arsenic trioxide，ATO）的临床应用，APL患者的5年总生存率达到70%以上，但仍有10%左右的患者复发或者耐药。谷胱甘肽（glutathione，GSH）及相关代谢酶等构成了机体内最为重要的抗氧化防御系统，能够保护细胞免受活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）的攻击；有研究表明，细胞内GSH的水平可影响细胞对ATO的敏感性；但尚未有大样本的临床研究关于谷胱甘肽的氧化还原系统中GSH/GSSG水平与APL患者对亚砷酸耐药的相关性以及其相关的作用机制。本课题拟通过高通量的临床样本的检测探究，GSH/GSSG水平与亚砷酸治疗APL的患者预后的相关性，探讨谷胱甘肽代谢途径在APL对亚砷酸耐药中的作用；有体内研究表明，ATO能够促进早幼粒细胞向成熟粒细胞的终分化，且APL细胞的分化与白细胞的发生一致；升高的白细胞主要为粒细胞，尤其是中幼粒细胞和晚幼粒细胞。ATO诱导的分化与白细胞增多和粒细胞上调密切相关。因此，评价砷代谢产物在APL患者血中和靶细胞（白细胞和粒细胞）中的分布，对于进一步阐明ATO在APL治疗中的作用至关重要，为探究ATO如何在临床中进行个体化治疗提供依据。 主要论点和论据 1.HPLC-MS-MS法可用于测定APL患者血中GSH、GSSG的含量； 本研究开发并验证了该方法，通过优化前处理方法、质谱方法、色谱方法等，最后经过专属性、线性、精密度、准确度、稳定性等系列方法学验证，本方法稳定准确。 2.GSH/GSSG与ATO治疗APL的患者预后具有相关性； 本研究纳入50例APL患者，对其血液样本中GSH、GSSG的水平进行检测，经比较分析发现，经ATO治疗的APL缓解组患者其GSH/GSSG显著高于未缓解组，GSH/GSSG有望成为有效的亚砷酸耐药的生物标志物。 3.联合用药可能影响血浆砷形态的分布；血浆中砷形态与ATO剂量呈弱正相关关系； 本研究纳入171例患者进行血液样本中砷形态的研究，均在诱导期和/或巩固期接受砷形态浓度监测；共计采集样本305次，采用HPLC-HG-AFS方法进行APL患者血中砷形态的检测。根据给药方式、联合用药及临床疗效分为六组（n = 305）：A组（n = 101）、B组（n = 22）、C组（n = 25）、D组（n = 141）、E组（n = 13）和 F组（n = 3）。研究结果发现：采用缓慢滴注的APL患者血浆中砷形态的分布趋势为DMAV > AsIII、MMAV > AsV（p < 0.01）；与单药ATO相比，联合用药的AsIII和tAs水平较高，AsIII%低，MMAV%和DMAV%低； 4.iAs在ATO在APL的诱导治疗中可能发挥主要治疗作用； 本研究采用HPLC-ICP-MS方法分析了25例APL患者白细胞样本和流式分选法收集的4例APL患者粒细胞样本中砷形态的分布，研究结果发现：iAs是ATO治疗APL病人白细胞和粒细胞内主要的砷化合物，而MMA和DMA的含量较低。 创见与创新 本研究建立并验证了HPLC-MS/MS法可用于测定人血中GSH、GSSG的浓度；提出了GSH/GSSG与ATO治疗APL的患者预后具有相关性，有望成为有效的亚砷酸耐药的生物标志物；缓慢滴注的APL患者血浆中砷形态的分布趋势为DMAV > AsIII、MMAV > AsV（p < 0.01）；与单药ATO相比，联合用药的AsIII和tAs水平较高，AsIII%低，MMAV%和DMAV%低；iAs是ATO治疗APL病人白细胞和粒细胞内主要的砷化合物，而MMA和DMA的含量较低。 社会经济效益，存在的问题 本研究通过临床样本的检测探究，发现GSH/GSSG水平与亚砷酸治疗APL患者的预后具有相关性，但本研究周期内纳入患者样本量较小，需进一步扩大样本量，有望发现有效的亚砷酸耐药的生物标志物（GSH/GSSG），能够有效提前预判药物耐药的潜在风险，增加药物疗效，提高患者的治愈率。血浆中砷化物浓度水平与分布对疗效具有预测作用，通过分析APL患者血中及靶细胞中砷代谢产物的分布，初步确定了亚砷酸治疗的APL的有效浓度范围，同样这部分纳入的患者样本量也比较小，仍需扩大样本量。

哈尔滨医科大学附属第一医院

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