（1）研究对象：选择黑龙江省医院老年心内科在2013年3月至2014年1月住院的初发急性心肌梗死并选择PCI术的患者60例，全部患者均具备典型胸痛病史、肌酸激酶、肌酸激酶同功酶及肌钙蛋白I显著增高、心电图动态ST-T演变，所有研究对象均排除以下疾患：恶性肿瘤、严重肝病、肾病综合症、感染性疾病、近期外伤及手术（1年内）及严重精神刺激。所有受试对象的性别、年龄、体重指数、冠脉病变程度等均无统计学差异。同时，选择黑龙江省医院体检中心在此期间的健康成人60例，所有研究对象均排除以下疾患：恶性肿瘤、严重肝病、肾病综合症、感染性疾病、近期外伤及手术（1年内）及严重精神刺激。所有受试对象的性别、年龄、体重指数等均无统计学差异。 （2）测定方法：本研究以ECV340内皮细胞作为研究对象，分别给予以PCI手术后12h、24h、48h和72h的患者血清，选取对数生长期的细胞，用血清分别作用24h和48h，采用TUNEL法观察细胞凋亡率，流式细胞仪观察细胞周期，放免法测定NO含量和NOS活性，ELISA法检测IL-1、IL-6等炎症因子含量，筛选PCI术后血管内皮细胞损伤的高峰时间和细胞作用时间。后加入不同浓度的EPO（100IU/ml、50IU/ml、20IU/ml、10IU/ml、1IU/ml）和不同浓度的CEPO（100IU/ml、50IU/ml、20IU/ml、10IU/ml、1IU/ml)。采用TUNEL法观察细胞凋亡率，流式细胞仪观察细胞周期，放免法测定NO含量和NOS活性，ELISA法检测IL-1、IL-6等炎症因子含量，筛选EPO及CEPO对PCI术后患者血清致ECV304细胞损伤的保护作用最佳浓度。EPO和CEPO对ECV304细胞损伤保护作用机制的研究则以生化法检测EPO和CEPO对LDH泄漏率的影响； Western blotting analysis检测JAK2及其磷酸化蛋白含量；免疫组化法分别检测内皮细胞中pERK、pJNK、pP38的含量。 （3）结论：1、用PCI术后12h、24h、48h和72h患者血清处理ECV304细胞可成功建立经PCI术后患者血清诱导的人血管内皮细胞损伤模型；2、48h患者血清处理ECV304细胞24h后细胞凋亡最为显著，内皮损伤最为明显；3、EPO处理ECV304细胞24h后，可促进正常细胞的增殖，以EPO 50IU/ml效果最为显著；而CEPO并不促进正常内皮细胞增殖；4、CEPO也可有效缓解PCI术后患者血清造成的细胞损伤，以CEPO 20IU/ml效果最为显著；5、CEPO可降低内皮细胞凋亡指数，显著增加NO和NOS含量，显著降低IL-1和IL-6； 6、CEPO可降低JAK2及p-JAK2表达，提示CEPO可通过调控JAK2/STAT5信号通路发挥心血管保护作用；CEPO可降低pERK、pJNK、pP38表达，提示CEPO可通过调控MAPK信号通路发挥心血管保护作用。 （4）创新性：1. 本研究首次建立经溶栓治疗后患者血清诱导的人血管内皮细胞损伤模型，为今后进一步研究心肌缺血——再灌注损伤提供实验平台； 2. 本研究首次筛选出溶栓治疗后患者血清诱导的人血管内皮细胞损伤出现的高峰时间，从而对研究溶栓治疗后的临床转归演变提供理论基础； 3. 本研究首次筛选出促红细胞生成素及氨甲酰化促红细胞生成素对人血管内皮细胞发挥作用的最佳浓度，为其临床推广应用提供计量学依据； 4. 本研究继续探讨氨甲酰化促红细胞生成素发挥抗心肌缺血——再灌注损伤的心脏保护作用的细胞信号转导途径，在分子水平上为其早日临床应用进行深入研究。 （5）发表文章： 1.Z-Y YANG, J-L LI, J KONG, S-S WU. Impairment of Vascular Endothelial Function Following Reperfusion Therapy in Patients with Acute Myocardial Infarction.The Journal of International Medical Research,2013;41（4）:1074-1078. 2.杨兆颖，李金梁，许超蕊，等.老年PCI术后患者血清在诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用，世界最新医学信息文摘，2015，15（48）：73-86.

黑龙江省医院

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