瑞舒伐他汀等对ECV304细胞胰岛素抵抗模型MAPK途径的影响
发布时间: 2023-12-08 浏览量:20
- 交易方式:面议
- 联系电话:15145100127
- 单位名称或姓名:李金梁
- 产业领域:航空航天
- 成果类型:
项目基本情况Basic information of the project
方法:
采用1.细胞培养2.电镜组织形态学检查3.MTT实验4.硝基还原法5.放射免疫法6.免疫组化7.Western blot8.激光共聚焦9.Realtime PCR等方法,研究瑞舒伐他汀等对ECV304细胞胰岛素抵抗模型MAPK途径的影响。
结果
(1)用低糖培养基建立胰岛素抵抗模型,发现药物作用48h后,10-4mmol/L胰岛素+30mmol/L葡萄糖+1μmol/L地塞米松上清液葡萄糖含量明显增加(P<0.05),提示葡萄糖消耗显著减少,为模型最佳剂量,胰岛素抵抗模型成功。
(2)用高糖培养基建立胰岛素抵抗模型,发现药物作用48h后,10-3mmol/L胰岛素+30mmol/L葡萄糖+1μmol/L地塞米松上清液葡萄糖含量明显增加(P<0.05),提示葡萄糖消耗显著减少,胰岛素抵抗模型成功。
(3)瑞舒伐他汀作用内皮细胞24h-48h后,103 -10-4umol/L浓度下葡萄糖含量无显著性差异(P>0.05),提示药物对ECV细胞葡萄糖消耗无显著影响;对NO及ET-1含量无显著差异(P>0.05),提示药物对于正常内皮细胞的内皮功能无明显影响。
(4)瑞舒伐他汀作用胰岛素抵抗的内皮细胞48h后,对葡萄糖含量无显著性差异(P>0.05),提示药物对胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗无影响。其中药物在MTT值无显著性差异(P>0.05),提示药物作用于胰岛素抵抗模型不会造成细胞增殖,不会对结果造成干扰。
(5)瑞舒伐他汀对EC细胞NO及ET-1分泌的影响:胰岛素抵抗的内皮细胞NO升高及ET-1降低显著,药物作用于胰岛素抵抗的内皮细胞48h后,对NO升高及ET-1降低均有显著性差异(P<0.05),提示药物对改善胰岛素抵抗内皮细胞的内皮功能作用显著。
(6)发现药物改善胰岛素抵抗的最佳浓度为瑞舒伐他汀10-3mmol/L,在低糖及高糖培养基中浓度相同。
(7)瑞舒伐他汀对EC细胞eNOS活性的影响:药物作用于胰岛素抵抗的内皮细胞48h后,与对照组相比药物显著提高细胞内eNOS的含量(P<0.05),提示药物通过改善eNOS活性,进而增加NO含量而改善内皮功能。
(8)瑞舒伐他汀对EC细胞PI-3K代谢途径的影响:药物作用于胰岛素抵抗的内皮细胞48h后,与对照组相比瑞舒伐他汀可显著提高PI-3K含量(P<0.05),提示瑞舒伐他汀通过改善内皮细胞PI-3K细胞转导途径而改善内皮功能。
结论:
1、成功建立了胰岛素抵抗的内皮细胞模型,胰岛素抵抗的内皮细胞NO明显降低,ET-1明显升高,提示内皮功能下降;
2、确定了瑞舒伐他汀改善胰岛素抵抗的内皮细胞内皮功能的最佳的浓度及时间;
3、在最佳浓度及时间条件下瑞舒伐他汀并未改善内皮细胞葡萄糖状态,但是通过提高NO含量直接改善内皮功能。
5、瑞舒伐他汀可明显提高内皮细胞中一氧化氮的含量,降低内皮素的含量,NO与ET-1呈负相关。提示NO与ET-1为一对相互制约的因素,共同参与改善内皮功能的机制。
6、瑞舒伐他汀能够明显改善内皮细胞的内皮功能,其机制可能为提高eNOS的表达,产生更多的NO,起到保护内皮细胞、对抗粥样硬化的作用。
7、瑞舒伐他汀通过PI-3K细胞转导途径改善了胰岛素抵抗的内皮细胞的内皮功能。
8、瑞舒伐他汀有直接内皮功能保护作用,此保护作用不依赖于他汀的调脂作用而存在,我们拟称其为“调脂外作用”。
创新性:
(1)本课题应用血管内皮细胞作为研究对象,建立胰岛素抵抗的内皮细胞模型,该模型在目前国内外还未见报道;
(2)本课题直接应用血管内皮细胞来研究胰岛素抵抗与动脉粥样硬化之间的关系,与动物模型实验互补,使实验结果更具有说服力;
(3)本课题预测NO及ET-1为胰岛素抵抗的独立危险因素,为日后临床上应用NO或ET-1作为检测胰岛素抵抗的指标提供依据;
(4)本课题成功提出了“建立药物研究胰岛素抵抗的内皮细胞平台”这一观点,为今后继续应用该平台筛选更多的药物奠定基础。
发表文章:
[1] J-L LI, Z YANG, S WU, J KONG. Relationship between Endothelial Nitric Oxide Synthase, Insulin Resistance and Macrovascular Disease in Patients with Acute Myocardial Infarction.The Journal of International Medical Research,2012;40:1-7.
[2] 李金梁,杨兆颖,陈海军,等. 瑞舒伐他汀改善胰岛素抵抗的内皮细胞功能的研究。中国医刊,2015年第50卷第10期。
管理团队与技术团队Management team and technical team
黑龙江省医院
效益分析Benefit analysis
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