新生犊牛腹泻是养牛场频繁发生、损失严重的重要系统性疾病之一，其危害主要体现在犊牛死亡、治疗成本增加以及因肠粘膜损伤而导致的饲料报酬降低。牛轮状病毒是公认的引起新生犊牛腹泻的最主要病原，约占犊牛腹泻疾病的40%-50%。轮状病毒感染引起的肠细胞损伤更利于产毒素性大肠杆菌的附着和感染，这种混合感染导致犊牛发生的腹泻更严重、死亡率更高，当有冠状病毒混合感染时，病情更加严重，发病犊牛的死亡率可高达50%-100%。由于轮状病毒很难分离、攻毒模型建立困难，所以我国到目前还没有牛轮状病毒商品化的疫苗。在确定我国流行的牛轮状病毒基因型主要为G6和G10型的基础上，哈尔滨兽医研究所研制了我国首个牛轮状病毒G6/G10基因重配二价减毒活疫苗(G6型R191株+G10型LLR-85株)，该疫苗的基因重配减毒株R191、及其与LLR-85联合应用作为牛轮状病毒基因重配二价减毒活疫苗的相关研究，已获得中国发明专利授权，R191毒株已获得转基因安全证书，建立了G6和G10型牛轮状病毒的攻毒模型，目前该产品已完成中试，正在准备申报临床试验批件。该疫苗怀孕母牛产犊前2-4周肌肉接种一次，剂量为3ml/头，犊牛出生后2h内饲喂初乳2-3L，可预防牛轮状病毒引起的新生犊牛腹泻；制备疫苗用毒株复制滴度高，培养的病毒无需浓缩纯化即可进行疫苗生产，生产成本低；疫苗剂型为活苗加佐剂，接种怀孕母牛可诱导高水平的血清和初乳抗体，免疫效力高；佐剂为水包油包水、添加比例小，疫苗易于吸收、注射局部不产生硬结，安全性高。项目产品为生物疫苗，所处行业为牛羊健康养殖行业，专业领域为动物疫病综合防控技术体系建立。目前，牛羊养殖向规模化、集约化快速发展，由于养殖规模急剧扩大，牛羊调运频繁，牛羊传染病频发、病死率明显升高，对牛羊养殖的健康可持续发展构成严重的威胁。除重大传染病之外，牛羊呼吸/消化/繁殖三大系统疫病广泛流行、频繁发生，呈现混合感染和高度致死的特征，危害严重。近些年，以新生犊牛腹泻为代表的牛消化系统疾病呈现明显增加的趋势，给养牛场带来巨大经济损失，其中轮状病毒是最主要的原发性病因。目前国内尚无预防新生犊牛腹泻的疫苗产品。本实验室从2007年开始研究牛状病毒G6/G10型基因重配二价减毒活疫苗，首先的工作是在国内主要牧区进行病原流调。采集腹泻犊牛的粪便或肛肠拭子，进行RT-PCR检测，进而对PCR产物进行序列测定、对流行株病毒进行基因分型以及比较进化分析。结果表明，我国牛群中流行的轮状病毒主要基因型同国外一样也是G6和G10型。对一些阳性样品进行病毒分离，进而分离到一些G6型病毒株和G10型病毒株，选取G6和G10型病毒各1株对犊牛开展致病性研究，进而建立牛轮状病毒本动物致病模型、并筛选出牛状病毒G6/G10型基因重配二价减毒活疫苗效检用的强毒株。在病原流调的基础上，选取一株具有优良复制能力和理想减毒特性的羊源G10型减毒株，用其作为骨架与G6型病毒进行基因重配，将G6型NCDV毒株的型特异性VP7基因重配给G10型毒株LLR-85，产生的重配毒株为G6型，命名为R191（Chang J T等, 2010）。LLR-85病毒株具有三个优良的表型：1）对易感宿主（婴儿、犊牛和羔羊）均无毒力，不但对动物安全，对人类也无公共卫生风险；2）接种婴儿或动物，均具有优良的免疫原性；3）在Mac-145细胞上复制具有明显高的病毒滴度，保证了疫苗生产的低成本。基因重配毒株R191，仅决定G型的VP7基因来源于G6型的NCDV毒株，其余10个基因节段均来自G10型的LLR-85毒株，因此R191作为G6型毒株获得了上述G10型毒株LLR-85的优良表型。LLR-85株与R191株联合使用，即为牛G6/G10轮状病毒基因重配二价减毒活疫苗（G6型R191株+G10型LLR-85株）。该疫苗的基因重配减毒株已获得中国发明专利授权，并获得转基因安全证书。目前，该疫苗已在哈尔滨维科生物技术有限公司完成中试生产并检验合格，计划于2022年6月申报临床试验。后期大部分是行政审批方面的工作。制备疫苗用毒株复制滴度高，培养的病毒无需浓缩纯化即可进行疫苗生产，生产成本低；疫苗剂型为活苗加佐剂，接种怀孕母牛可诱导高水平的血清和初乳抗体，免疫效力高；佐剂为水包油包水、添加比例小，疫苗易于吸收、注射局部不产生硬结，安全性高。工艺简单，已完全成熟，具有可行性。目前我国奶牛存栏约600万、肉牛5000万、牦牛3000万、水牛1000万头，2020年肉羊出栏3.2亿只。目前，国家又在大力鼓励和扶持奶牛养殖，因此预期在未来五年内，奶牛的养殖规模还会迅速扩大。可以预期，预防犊牛羔羊腹泻的轮状病毒二价减毒活疫苗具有巨大的市场潜力。项目是否具有经济和社会效益，关键是项目所聚焦的问题是否是行业真正急需解决的问题，也就是聚焦的问题是否面向行业需求。而新生犊牛腹泻，本研究团队经过15年的潜心研究，可以确定是严重影响养牛业发展的重要传染病。因此，项目孵育转化成功，不但可解决行业问题，还可以为企业带来经济效益。目前我国奶牛存栏约600万、肉牛5000万、牦牛3000万、水牛1000万头。目前，国家又在大力鼓励和扶持奶牛养殖，因此预期在未来五年内，奶牛的养殖规模还会迅速扩大。此外，轮状病毒也是羔羊腹泻的主要病原，但由于时间和经费的限制本疫苗只针对犊牛腹泻进行了研究，因此产品名暂定为“牛轮状病毒G6/G10基因重配二价减毒活疫苗”。本产品可用于预防轮状病毒引起的犊牛腹泻，对于轮状病毒引起的羔羊腹泻也具有潜在的应用价值。可以预期，预防犊牛羔羊腹泻的轮状病毒二价减毒活疫苗具有巨大的市场潜力。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

该项目为储备库项目资源，暂无效益分析内容。