本研究项目利用免疫蛋白质组学技术，以副猪嗜血杆菌血清5型参考株为研究对象，对其分泌组中的主要保护性抗原进行了筛选和鉴定。经双向电泳和Western blot后用副猪嗜血杆菌康复期阳性血清进行感作，将呈现阳性反应的斑点对应的蛋白进行质谱鉴定，一共鉴定到6种蛋白，分别是AfuA、OppA、OppA2、HbpA、HktE和OmpP2。将以上蛋白进行人工重组表达和纯化，以小鼠为模型进行免疫保护效力的初步评估。结果显示，AfuA、OppA、OppA2、HbpA能够刺激小鼠产生较高滴度的抗体，并能够保护小鼠抵抗不同血清型菌株的攻击，表明以上蛋白均具有良好的免疫原性。进一步创制了以AfuA、OppA、OppA2、HbpA为主要组分的副猪嗜血杆菌亚单位疫苗。本研究成果属于畜牧兽医行业中的养猪业。一直以来，猪呼吸道细菌病给养猪业带来了严重的危害，造成很大经济损失。随着我国“减抗、限抗”政策的出台和实施，抗生素在细菌病防制方面受到越来越多的限制。因此，猪呼吸道细菌病迫切需要安全高效的新型疫苗来预防和控制传染病的发生和传播。1）首次鉴定到了副猪嗜血杆菌主要保护性抗原AfuA。2）首次鉴定到了副猪嗜血杆菌主要保护性抗原OppA。3）首次鉴定到了副猪嗜血杆菌主要保护性抗原OppA2。4）首次鉴定到了副猪嗜血杆菌主要保护性抗原HbpA。5）首次创制了副猪嗜血杆菌亚单位疫苗。本研究项目拥有5项国家发明专利，具有自主知识产权。对于副猪嗜血杆菌这样主要毒力因子和保护性抗原未知的传染病来说，鉴定其主要保护性抗原从而研制疫苗无疑是具有重要意义的。蛋白的体外重组表达和纯化是很成熟的技术，已经应用于生物医药行业的方方面面。本研究成果的实物形式是以重组蛋白为主要组分的亚单位疫苗，用于预防副猪嗜血杆菌病。具有很好的安全性。2016年4-7月，本研究项目的核心发明——副猪嗜血杆菌亚单位疫苗在哈尔滨鸿福养殖有限责任公司某猪场进行了小规模试用。自从应用该疫苗以来，显著降低了该场副猪嗜血杆菌病的发病率和死淘率，提高了生猪的存栏量和出栏率，并大大减少了其它病的发病和混合感染，取得了良好的经济效益。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

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