猪圆环病毒病是继高致病性猪蓝耳病之后国际上公认的危害养猪业的重要疫病，感染猪主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征。该病以5～12周龄的猪发病率较高，急性暴发猪群的死亡率可达10%～25%。此外还可引起皮炎与肾炎综合征、呼吸道疾病综合征、先天性震颤、母猪繁殖障碍等多种疫病，给我国养猪业造成巨大经济损失。疫苗预防接种是控制本病的有效手段，而疫苗研制遇到了培养的病毒含量较低，免疫效力评价不易等难题。针对这些问题，本项目探索出一系列科学方法，攻克多项科技难关，掌握了病毒繁殖规律，研制成功我国第一个猪圆环病毒疫苗，创制了诊断试剂盒，拥有自主知识产权，解决了我国猪圆环病毒病的防控难题。猪圆环病毒2型灭活疫苗2010年获得国家新兽药证书，技术转让哈尔滨维科生物技术开发公司和上海海利生物技术有限公司，建立了疫苗生产线，按制定的规程与检验标准实现了规模化大生产，产品全国推广应用。自2010年9月上市以来，该疫苗销售额达到30,230万元，推广规模达3190万头份。建立了10个规模化养殖猪场作为示范基地。对疫苗免疫效果进行跟踪观察，该疫苗安全有效，应激反应低，死亡率显著下降，疫苗保护率达95%以上，生猪出栏提早5～7天，药物使用量减少约30%，每头猪节约成本约50元，与进口疫苗作对比主要性能指标相当，但售价仅为进口产品1/3。该疫苗能够显著改善猪场的生产性能，断奶仔猪发病率和死淘率显著下降，为我国猪圆环病毒病防控做出了贡献。荣获了2010年重大农业科技产业化进步奖，疫苗种毒获国家发明专利证书，发表论文8篇，培养博士4人，硕士15人，生产技术人员35人；举办技术推广会55场，培训5500人次。实现了产学研对接，产生了巨大经济和社会效益。我国是世界养猪大国，生猪年存栏量高达6.5亿头，由于猪传染病的流行给养猪业造成巨大经济损失。猪圆环病毒病临床上以断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾炎综合征、猪呼吸道综合征、母猪繁殖障碍、先天性震颤等多种疾病表现形式，死淘率为10%～25％，每年造成经济损失达300多亿元。疫苗接种是控制本病的关键，而疫苗研制遇到的主要困难是病毒不易培养，抗原产量较低，免疫效力评价不易确定。该病毒感染细胞不产生病变，蚀斑克隆无法纯化。以病毒感染性克隆技术构建了带有标记的PCV2毒株，解决了疫苗毒株与自然野生型毒株鉴别问题，实现了毒株克隆化。以标记毒株作为疫苗毒种，攻克了病毒体外培养、疫苗生产工艺及免疫效力评价等难题，成功地研制出我国第一个猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株），创制了诊断试剂盒，解决了猪圆环病毒病防控难题。1、阐明了我国猪群中猪圆环病毒2型（PCV2）流行毒株的遗传变异规律。解析19个PCV2流行毒株的基因组，分类PCV2a、2b和2d三个基因群，各占15.8%、73.7%和10.5%，创建了PCV2毒株PCR-RFLP基因分型技术。制备了重组PCV2-Cap蛋白单克隆抗体，创制了诊断试剂盒，为疫苗的研制奠定了基础。本内容属预防兽医学；旁证材料：附件32、38、39.选自9个省份不同地区养猪场送检的90份发病猪淋巴组织样品，从病毒核酸检测阳性样品中分离19个PCV2毒株，基因序列测定分为PCV2a、PCV2b和PCV2d三个基因亚群（图1），各占15.8%、73.7%和10.5%。病毒基因组为1766 nt、1767 nt和1768 nt，以1767nt毒株为基准，其第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766 nt毒株；第1040位有1个碱基插入后突变成1768 nt毒株。对19个毒株的PCV2-Cap蛋白编码基因分析，有4株基因发生了突变，出现了705 nt和708 nt两种突变型，使Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸延伸。用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株基因组PCR产物进行限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP），可见三种基因片段类型（图2），可作为流行毒株分型鉴别手段。目前我国猪群中以PCV2b流行毒株为主，也出现了少量1766 nt变异毒株，表明流行毒株呈多样性。疫苗安全好、免疫保护率高 用5批次疫苗进行了单剂量、单剂量重复和大剂量免疫试验。在观察期内，所有试验仔猪临床无异常反应，免疫妊娠母猪未发现引起流产、死胎等繁殖障碍性疾病，所产仔猪健康良好，表明疫苗安全性良好。用5批次疫苗免疫猪攻毒后均表现良好的保护效力。日增重率较攻毒对照组高5%以上；疫苗免疫猪病理剖检未见异常，各脏器病毒核酸载量呈低水平。仅有1批次疫苗免疫攻毒组中1头猪荧光定量PCR检测病毒载量较高，判为未保护。同设的攻毒对照组出现明显发病，表现为食欲减退，体温一过性升高，超过40.5℃，进行性消瘦，被毛粗糙，体表淋巴结肿大等症状，日平均增重率下降5%，与免疫组统计学差异显著（p<0.05）。病理剖检可见全身淋巴结肿大，间质性肺炎和肾脏灰白色斑点；淋巴结可检测到病毒抗原，病毒载量均超过1.45×109.0拷贝/g。猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)获国家新兽药证书(二类)、国家重点新产品证书、农业部兽药产品批准文号；疫苗生产用毒株获3项国家发明专利证书，其中1项获第十五届中国专利优秀奖。疫苗生产技术转让2个大型生物制品企业，实现了产业化，在全国26个省举办技术推广会55场，培训临床技术人才5500人次，疫苗推广规模达10221.37万头份，近三年新增销售额42390.91万元，新增利润15698.42万元，新增税收5276.54万元。经中国农科院农业经济与发展研究所测算，项目每元科研投资每年为社会增加81.02元的纯收益，具有较高的投资回报率。本项目获得省部级奖3项和国家优秀专利奖1项，发表论文60篇，包括SCI论文18篇（影响因子45.5）和国内核心刊物42篇，培养硕博研究生20名。

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

该项目为储备库项目资源，暂无效益分析内容。