帕金森病（Parkinson's disease，PD），人们又称之为"震颤麻痹"，属于一种发生在中脑黑质纹状体通路的中枢神经系统变性疾病。随着当今社会人口老龄化现象的日趋加剧，该疾病的发病率不断攀升，在神经系统变性疾病的发病率中高居第二名。本病病情表现为进行性加重，后期将会严重影响到病人的活动能力、生存的质量，如果不积极对之进行有效的治疗，病人将会面临极大的痛苦。左旋多巴替代疗法是目前为止研究本病的各种临床及实验研究所采用的药物对照治疗的"标准对照药"，它确实能够在较短的时间内对患者出现的临床症状具有明显的改善作用，但却不能阻止本病的发展进程，而且长期应用，有的出现疗效减退、有的发生症状波动、还有的表现出不同程度的运动障碍等等。总体来讲，药物及外科手术等方法均无法从根本上阻止多巴胺能神经元凋亡这一病理进程，因此在临床及实验中亟待研究出有效的阻止多巴胺能神经元变性的治疗方法。 本病的典型病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元缺失，在此过程中"细胞凋亡"扮演着主要的角色，是参与中脑黑质多巴胺神经元丢失的主要途径之一。近年来针灸治疗ＰＤ具有广阔前景的各项研究层出不穷，动物实验研究结果也证实了针灸治疗可以使黑质神经细胞的凋亡率显著下降，从而显示出对黑质－纹状体系统多巴胺能神经元的具有明显的神经保护效果。而对多项临床研究进行Ｍｅｔａ分析也显示，针灸治疗ＰＤ疗效可靠、无毒副作用、且可以减少多巴胺用药量和毒副反应，充分体现了针灸治疗本病的特点和优势，但对其机理的研究还不够深入，如何提高临床疗效亦未见报道。帕金森病目前所面临的问题即是开发出抗DA能神经元凋亡的有效的治疗方法，既然左旋多巴替代疗法无法阻止帕金森病脑内黑质DA能神经元的积蓄变形，甚至有可能促进其凋亡的发生，那么，在以往研究的基础上，探讨针刺是如何通过影响钙离子通道来调控细胞凋亡的，换而言之，是如何通过调节钙稳态失衡来抑制细胞凋亡的，明确这些机制对进一步探讨帕金森病的针刺治疗可提供更多的理论依据。 本研究以美多芭为对照干预，观察不同电针（音乐电针、脉冲电针）百会、太阳穴对PD模型大鼠造模前后维持细胞钙稳态的不同环节的影响；从相关蛋白及其基因表达方面观察其对DA神经元凋亡的影响；并对DA能神经元的形态、数量做了形态学上的进一步验证，从而探讨不同干预手段是否对其发挥调节作用，及其发挥作用的途径、靶点、物质基础以及优效性。采用单侧纹状体双靶点注射6-OHDA建立PD大鼠模型，通过阿扑吗啡（APO）诱发的行为学检测验证模型的成功率。采用分光光度法测定大鼠脑内黑质Ca2+浓度、Ca2+-ATPase活性、Na+-K+-ATPase活性、Ca2+-Mg2+-ATPase活性；免疫组化染色法检测钙结合蛋白D28k的表达；以原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡水平；免疫组织化学法检测黑质Caspase-3表达；原位杂交法检测黑质bcl-2mRNA、baxmRNA表达；HE染色、免疫组织化学法染色观察黑质多巴胺能神经元及TH免疫组化染色阳性细胞；应用高效液相色谱-电化学法测定各组大鼠纹状体内多巴胺含量。采用美多芭灌胃为对照干预方法，应用音乐电针及脉冲电针为治疗干预方法。结果表明：1、不同电针尤其是音乐电针干预，可显著提高PD大鼠黑质三种ATPase活性,降低Ca2+的浓度以及Calbindin-D28k的阳性表达,从而改善PD大鼠脑组织中钙稳态的状态。2、不同电针尤其是音乐电针干预，不仅能够减轻黑质多巴胺能神经元的凋亡指数情况，而且可以减轻Caspase-3的阳性表达，可上调凋亡抑制因子Bcl-2mRNA的表达以及下调凋亡促进因子BaxmRNA的表达，促进二者之间关系恢复平衡。3、不同电针干预可使HE染色及电镜观察下黑质神经细胞数目增多、形态结构趋于正常；可增加黑质区TH免疫反应阳性细胞的数量、使细胞结构和形态接近正常，TH阳性表达面密度、数密度及积分光密度均升高，可使纹状体多巴胺含量有所增加。4、美多芭干预对PD模型大鼠脑内钙稳态状态及神经元凋亡相关指标均无明显影响，仅能增加脑内纹状体的多巴胺含量。得出以下结论：1、不同电针能够实现在PD过程中抗DA能神经元凋亡的作用效果，可使DA能神经元形态改善、数量增多以及TH阳性细胞的表达增多。2、不同电针干预从维持DA神经元钙稳态；从基因调控水平上协调bcl-2与bax的表达以及在效应阶段阻止Caspase-3的激活与释放这三个不同角度探讨了其抗DA神经元凋亡的作用途径。3、不同电针干预的作用靶点为调节脑组织钙稳态的失衡，并从不同环节使钙离子浓度及其相关ATP酶活性恢复正常。4、不同电针抗DA能神经元凋亡的物质基础可能为各种ATP酶、D28K，bcl-2与bax、以及Caspase-3，结果是使其分布与表达恢复正常。5、提高电针疗效的手段之一为音乐电针干预。 本研究从调节钙稳态失衡角度探讨了不同电针保护多巴胺能神经元治疗本病的作用机制，同时优选出能够提高临床疗效的针灸治疗方法。实现了在针刺治疗PD的神经保护机制研究方面获得突破性进展，将为PD的治疗带来新的希望。

黑龙江省中医药科学院

该项目为储备库项目资源，暂无效益分析内容。