（1）课题来源与背景 “猪繁殖障碍疾病病原调查与综合防治”是2017年由齐齐哈尔市科技局批准立项并由黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院承担的农业指导项目,项目编号NYZD-2017012; （2）研究目的与意义 引起猪繁殖障碍病原传染性因素中，其中以猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）常见，发生这三种疾病的临床症状极为相似，近些年又以混合感染表现居多，单纯依据临床症状很难进行做出确切诊断，传统诸如血清学、免疫学等手段方法存在操作繁琐、周期长、敏感度差以及检测耗时长等缺点，无法满足目前实验室和临床大批量检测。本项目根据黑龙江省猪繁殖障碍流行病学及流行毒株（PRRSV是NADC30毒株；CSFV是Shimen毒株；PCV2是ZJ毒株）特点，建立的多重PCR方法适合黑龙江省猪繁殖障碍CSFV、PRRSV和PCV2三种疫病的病原检测。该方法操作简单快速、准确性高、时间短，可用于这三种疾病的确切诊断，为三种疾病诊断提供新的手段，有效防控了我省猪繁殖障碍疾病的蔓延。 （3）主要论点与论据 根据GenBank中PRRSV、CSFV和PCV2的标准参考毒株基因组序列选择PRRSV的ORF7基因、CSFV的E2基因和PCV2的ORF2基因做为扩增靶序列，应用Primer5.0和Oligo7.0软件自行设计3对特异性引物，建立了同时检测CSFV、PRRSV、PCV2三种病毒多重RT-PCR检测方法，可同时扩增出204bp（CSFV）、314bp（PRRSV）和485bp（PCV2）目的条带。经灵敏性试验、特异性试验和重复性试验，结果显示该多重PCR灵敏性高、特异性好和重复性稳定。该多重PCR经检测临床96份疑似繁殖障碍病猪，感染2种以上病毒的样品比例为34.3%（33/96），多重PCR与单一PCR符合率为100%。 （4）创建与创新 自行设计的猪繁殖障碍疾病的三种病毒（CSFV、PRRSV、PCV2）的PCR引物，通过优化获取了最佳PCR反应条件，建立了CSFV、PRRSV、PCV2多重PCR检测方法。目前市场上有单一DNA病原检测试剂盒和两种RNA病原检测试剂盒，目前还没有DNA和RNA同时检测的多重RT-PCR试剂盒，可以形成商品化。 （5）社会经济效益、存在的问题 该项研究成果应用于兽医临床病原检测，为猪场及时淘汰病猪，减少同群感染，减少了继发感染。可面对养猪场进行宣传推广，前景广阔。目前只是选择的猪场使用了此方法检测，将努力扩大推广面，使更多的猪场受益。按照国家兽药典的具体要求，补充相关实验，做成商品，形成产业化，创造价值。 （6）历年获奖情况 无

黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院

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