①课题来源与背景：“猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用”是2019年由齐齐哈尔市科技局批准立项并由黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院承担的农业指导项目（NYZD-201901)。猪病毒性腹泻是对养猪业危害较严重的一类疾病，近年来，该病的流行呈不断上升趋势，给养猪业造成严重经济损失。猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）是3种引起猪病毒性腹泻的重要病原。各种年龄的猪均易感染，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100%，尤其以一周龄以内哺乳仔猪受害最为严重。自2010年以来，中国猪群爆发了严重的仔猪腹泻，仔猪病毒性腹泻的发病率呈明显上升趋势，给中国养猪业造成了严重的经济损失。检测结果显示，大量仔猪腹泻由猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒引起。猪轮状病毒是一种人兽共患病原，在猪群中感染率也很高，PoRV感染后，使仔猪免疫力急剧下降，从而诱发多种腹泻病原体混合感染，导致仔猪死亡率上升，或生长缓慢、停滞。猪嵴病毒（Porcine kobuvirus，PKV）近年在仔猪腹泻病料中呈现很高的阳性感染率，且可能是肠道疾病的继发或诱导因素，大部分以混合感染为主，在国内外猪场中普遍存在，仔猪PKV 的感染也因此引起了越来越多研究人员的注意。腹泻病不仅会降低仔猪成活率，且还会造成饲料转化率降低、日增重降低等后果，这些都对畜牧业的发展和规模化猪场的经营造成严重阻碍。②研究目的与意义：本项目通过对PEDV、TGEV、PoRV和PKV四种病毒设计四对引物，并对退火温度、引物浓度等反应条件进行优化，建立了一种可同时检测以上四种病毒的多重RT-PCR检测方法。该方法特异性强、敏感性高，可用于这四种病毒的临床快速检测与流行病学调查，为猪病毒性腹泻的流行病学调查和防控提供一定技术支撑。③主要论点与论据：（1）根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计了4对特异性引物，构建了PEDV、TGEV、PoRV和PKV四种病毒各自的重组质粒，并优化了PCR反应条件（包括退火温度和引物浓度），对所建立的多重RT-PCR检测方法进行特异性和敏感性检测，并进行了临床初步应用。结果显示，所建立的多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高，可用于这四种病毒的临床快速检测与流行病学调查。④创见与创新：构建了四种猪腹泻病毒的重组质粒；建立了四种RNA病毒引起的猪腹泻疾病的多重RT-PCR检测方法；首次对齐齐哈尔及其周边地区进行全面的猪腹泻疾病的流行病学调查。⑤社会经济效益，存在的问题：本项目的推广应用，降低了猪死亡率、增加了猪及猪产品的数量，提升公众食品安全系数，增加饲养者收入，提高畜牧业经济效益。带动了饲料加工业和肉制品等相关产业发展，延长了产业链条，扩大了人员就业。课题组从2019年开始推广应用PEDV、TGEV、PoRV、PKV四种病毒多重RT-PCR检测方法，为齐齐哈尔地区及周边三种疾病的预防、净化提供了技术支持，为猪场及时淘汰病猪、减少了同群感染，同以往相比，成年猪和仔猪同期患腹泻疾病均减少。项目的推广应用，给猪场节约了检测成本，提高了经济效益。⑥历年获奖情况：无。

黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院

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