1、课题来源与背景 该课题是2015年齐齐哈尔市科学技术计划项目。 一般说来，小鹅瘟根据流行病学、临床特征和剖检变化所表现的特点，可以做出初步诊断。但是，最急性型小鹅瘟与近年来新发现的鹅副粘病毒病具有相似的临床和剖检特征，彼此很难区分，造成两种疾病的误诊，给养鹅户带来了巨大的经济损失。为了能对临床病例进行早期诊断，建立小鹅瘟、鹅副粘病毒病特异、敏感、快速的双重PCR方法具有重要意义。 2、技术原理及性能指标 本项目所建立的双重PCR方法，能在一次反应中对所疑似由小鹅瘟、鹅副粘病毒两种病原体引起的传染病进行核酸鉴别诊断。 在进行双重PCR的研究中，引物的设计至关重要，本研究设计的两对引物，GC%含量相近，Tm值相近，这就保证了在相同的退火温度下，小鹅瘟和鹅副粘病毒都能得到很好的扩增。另外，利用DNAman和Primer5对这两对引物进行了同源性、二级结构等分析，以避免两对引物之间形成复杂的二级结构及引物二聚体而影响扩增后结果判定。本研究在引物设计上利用扩增片段长度的不同（小鹅瘟855bp、鹅副粘病毒665bp）可直接判定扩增结果，使该双重PCR在结果判定时更简便、直观和实用。 利用双重PCR对小鹅瘟病毒、鹅副粘病毒、二者混合病毒、鸭瘟病毒、禽多杀性巴氏杆菌、禽大肠杆菌进行检测，结果小鹅瘟病毒和鹅副粘病毒同时得到了与实验设计大小相符的两条扩增带，而对照毒株没有扩增出可见的条带，说明此方法特异性高。敏感性检测结果表明，该双重PCR具有相当高的敏感性，该双重 PCR最低能检测到1.32ng/L 的鹅副粘病毒、298ng/L 的小鹅瘟病毒核酸模板，即可检测出痕剂量的核酸模板。 3、技术的创造性与先进性 该项目对小鹅瘟病毒NS基因和鹅副粘病毒 HN基因的一段保守区域各设计1对特异性引物，优化反应条件优化等建立双重PCR方法;该方法特异性好、敏感度高；能够更早的确定疑似病雏鹅是小鹅瘟、鹅副粘病毒病或二者混合感染，从而更好确定防控方案。 4、技术的成熟程度，适用范围和安全性 小鹅瘟病毒和鹅副粘病毒双重PCR方法检测技术成熟，适用于检测部门或实验室对疑似病雏鹅进行小鹅瘟和鹅副粘病毒病的检测；该检测方法安全、结果直观、可靠。 5、应用情况及存在的问题 本研究在黑龙江省部分地区防疫站等对禽病检测部门实验室进行了推广应用，取得了良好的效果，具有广泛的发展前途和应用前景，应进一步普及应用。 6、历年获奖情况 "卵黄抗体生产工艺工艺建立与产业化"获得局科技进步一等奖。证书号：[2013]-10-02 "鹅细小病毒、鹅副粘病毒二联灭活疫苗研究"获得局科技进步二等奖。证书号：[2013]-12-01 "小鹅瘟环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法的建立" 获得局科技进步三等奖。证书号：[2013]-21-05 "鹅细小病毒主要免疫原性基因VP3在杆状病毒的表达" 获得局科技进步三等奖。证书号：[2013]-22-05

黑龙江省兽医科学研究所

该项目为储备库项目资源，暂无效益分析内容。