本项目以酿酒酵母31206作为出发菌株，采用三重复合处理对MT产生菌的诱变效果进行了研究，筛选出一株高产突变株N-8，通过对突变株N-8生产类MT的摇瓶发酵培养过程的研究，确定了发酵生产MT的最佳培养条件。利用双水相萃取酵母源MT，确定了双水相萃取MT的最佳工艺条件。 诱导酵母菌生产MT、超声波破碎细胞壁、双水相萃取、离子交换层析透析分离纯化获得金属硫蛋白的两个亚型MT-I、MT-II,以此作为研究对象，分别研究了其总还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基的清除能力、脂质过氧化作用的抑制能力。金属硫蛋白的两个亚型MT-I和MT-II对羟自由基均有一定的清除能力，且同等浓度的情况下强于VC对自由基的清除能力。在光谱的分子结构中两个MIT构型之间的差异主要体现在酰胺I带和酰胺III，即振动的主链，其由红外和拉曼光谱，可以确认的特性。其结果与该检测出的荧光光谱一致。所以在肽链的二级结构这种差异可能是不同的MT亚型功能差异的主要原因。 通过不同pH处理抗氧化能力较强的MT-I，实验结果表明中性和碱性pH值条件下样品的抗氧化活性较好。酸性pH值条件下，MT对脂质过氧化的抑制能力显著降低。 以DMSA与常见动物源MT为对照，一次性腹腔注射醋酸铅形式构建急性铅中毒小鼠模型，探究不同构型酵母源MT对急性铅中毒小鼠排铅及过氧化损伤修复作用。实验结果表明，MT能够有效降低急性中毒小鼠血铅水平，且呈显著的量效关系，同时促进小鼠血清中MDA、S0D及GSH-铅驱测Px水平驱于正常，其中MT-1与MT排铅效果无明显差异，均显著高于MT-II，推测与酵母源MT特殊的氨基酸结构及不同来源的MT于消化道内吸收程度和消化程度不同有关。以慢性饮用醋酸铅溶液方式构建慢性铅中毒小鼠模型，以常见排铅药物DMSA与动物源MT为对照，探究不同酵母源MT亚型对慢性铅中毒小鼠排铅及肝脏保护作用。综合慢性铅中毒小鼠血铅、血常规指标、肝功能指标及肝肾组织病理学观察结果，酵母源MT对慢性铅中毒小鼠具有良好的排铅及肝脏保护作用，其中高浓度MT效果最好。明确MT在促排重金属机制中的量效关系和构效关系具有重要的理论和应用意义，为探讨MT的多元作用提供科学依据和理论支撑。

黑龙江八一农垦大学

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