该课题是来源国家自然科学基金项目 奶牛脂肪肝病尿液差异表达蛋白筛选（31001094）。以脂肪酸代谢紊乱、肝脏脂肪蓄积和脂肪变性为病理特征的奶牛脂肪肝病是奶牛重要的群发性常见多发病，严重影响奶牛的生产性能和经济效益。鉴于奶牛脂肪肝病既无特征性临床表现，又无适用的诊断方法，临床早期诊断极为困难，利用蛋白质组学技术可以高通量筛选疾病相关差异表达蛋白的特点，运用比较蛋白质组学、分子生物学和免疫学技术，通过筛选脂肪肝病牛尿液中差异表达的特异蛋白质或多肽，并对其进行分子生物学验证，这些差异表达蛋白可作为脂肪肝病牛非损伤性的特异诊断标志物，为该病的早期诊断、监测和防治提供理论和方法学基础。本项目运用多平台相结合的蛋白组学技术，重点研究了脂肪肝病奶牛与健康奶牛相较体内差异蛋白的筛选，鉴定和验证，并对奶牛脂肪肝并的发病机制进行初步探索。通过对奶牛脂肪肝并组和健康组之间的iTRAQ-HPLC-MS,SELDI-TOF-MS实验，结合两组奶牛血清甘油三酯，BHBA，葡萄糖等生化指标检测，获得如下新结果：（1）建立了基于iTRAQ-HPLC-MS,SELDI-TOF-MS蛋白质组学技术的奶牛脂肪肝病尿液差异表达蛋白的分析方法。（2）运用iTRAQ技术首次获得了奶牛脂肪肝病组与健康组之间的110个差异表达蛋白，其中60个表达上调，50个表达下调；并进行生物学分析，成功地筛选出了奶牛脂肪肝病的四个关键性调节因子，分别为玻连蛋白，载脂蛋白，凝血酶原，和丛集素。应用主成分分析，聚类分析和决策树分析以及常规数据统计分析获得39个差异表达蛋白，并进行筛选和鉴定，成功确定了脂肪肝病组奶牛体内呈现显著性降低的12种差异蛋白。成功实现了两种组学技术的相互验证，结果显示两种实验结果出现重叠，具有共同的差异表达蛋白。经过讨论分析，初步证实了四种关键性因子可能是奶牛脂肪肝病的重要诊断生物标志物。以上研究新成果，从生理，病理以及蛋白组学角度对奶牛脂肪肝病的发病机制进行全新阐述，将为奶牛脂肪肝病的早期检测和诊断提供新依据。

黑龙江八一农垦大学

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