成果简介　1、模型制造情况 　　　各组大鼠在第一次注射免疫原后一般状况和体重均无明显的变化，在第二次注射免疫原后15天左右，EAMG模型组大鼠相继出现肢体无力，活动度减少，身体震颤，毛发枯萎无光泽，食量减少，抓握力减弱在重复抓握后更加明显，随着时间的推移，症状逐渐加重，于第三次加强免疫后10天达到高峰，体重从出现症状后开始下降，且随着病情的逐渐加重，体重下降幅度也逐渐加大，而经雷公藤治疗的大鼠发病时间相对迟缓，症状较轻，该组大鼠的体重下降程度也明显小于模型组。免疫第70天后，雷公藤治疗组和EAMG模型组比较，临床评分和体重变化均有显著性差异，P＜0.01，说明雷公藤多甙能缓解EAMG的临床症状。　　 　　　 　　　2 不同处理组大鼠血清中IL-17、IL-6和IL-4、IFN-γ细胞因子的水平。 　　　ELISA方法检测不同处理组大鼠血清中细胞因子结果：与EAMG模型组比较，TWP治疗组大鼠和CFA组大鼠血清中IL-17、IFN-γ和均明显降低（*P <0.01）；而IL-4、IL-6则明显增高（*P <0.01），有显著性差异 　　　 　　　　　 　　　3 不同处理组大鼠胸腺和脾中IL-17、IL-6和IL-4表达情况 　　　免疫组化方法检测胸腺和脾中IL-17和IL-6和IL-4结果：免疫组化染色后，被染成棕黄色细胞为阳性细胞。与EAMG模型组比较，TWP治疗组大鼠胸腺中IL-17明显降低；而IL-6和IL-4则明显增高，有显著性差异；而EAMG模型组胸腺中IL-17表达与CFA组相比较增高明显，而IL-6和IL-4则明显低于CFA组，差异有显著性。　 　　　 　　　4 TWP对EAMG大鼠外周血和胸腺中Vβ1-20基因谱系的影响 　　　　 　　　结果表明，正常对照组大鼠外周血单个核细胞TCR BV无限制性取用倾向，而在CIA模型组大鼠外周血单个核细胞TCR BV2、TCR BV3和 TCR BV4和表达水平明显增高。　　 　　　EAMG模型组大鼠胸腺组织TCR BV多个亚家族基因呈优势扩增，TCR其V区识别抗原后基因发生重排，mRNA表达水平改变。CFA组大鼠胸腺单个核细胞TCR BV无限制性取用倾向，而在EAMG模型组大鼠胸腺单个核细胞TCR BV10、TCR BV12、 TCR BV14、TCR BV16、TCR BV19表达水平明显增高。说明在抗原的刺激下，TCRBV基因存在着优势取用。 　　　从雷公藤多甙治疗组大鼠TCR BV基因表达谱看，说明雷公藤多甙可以降低TCR BV10、TCR BV12、 TCR BV14、TCR BV16、TCR BV19表达水平，纠正TCR谱在外来或自身抗原的驱动下呈现的偏移，降低胸腺中特异性活化的抗原反应性T细胞，从而减少自身反应性T细胞的活化，减轻症状，对EAMG发病有较好的治疗效果。 　　　5、 胸腺巨噬细胞透射电镜观察 　　　胸腺细胞凋亡后，巨噬细胞活跃，吞噬功能增强：可见吞噬细胞膜与淋巴细胞融合；吞噬细胞内含有吞噬的凋亡小体；可见细胞内吞噬的高密度颗粒。还可观察到吞噬细胞内核染色质裂解；吞噬细胞胞质中含有带有膜结构的包涵体物质，质膜下有大量吞噬体。 　　　6、 胸腺巨噬细胞免疫组织化学和ACP双重染色 　　　本课题组，在前期的的研究中发现，胸腺巨噬细胞有四种不同类型的亚型，和分布情况。胸腺巨噬细胞可被F4/80、Mac-2和ED1三种单克隆抗体标记，F4/80+细胞、Mac-2+细胞和ED1+细胞均显示较高的酸性磷酸酶（ACP）活性，活性高的阳性细胞主要集中在皮质和皮髓质交界区。 7、讨论和结论 　　　重症肌无力是一种世界范围内的神经系统自身免疫性疾病，尽管相对于其他疾病而言，重症肌无力的发病率和病死率均较低，但是他给患者所带来的痛苦以及社会、家庭所带来的经济负担我们同样无法回避的事实。MG被认为是B细胞介导的、T细胞依赖的自身免疫性疾病，但其确切的发病机制尚未完全明了。T细胞对MG发病的启动作用已经有人证实，但是随着T细胞亚群的不断认识，细胞因子的不断发现，Th1/Th2/Th17/Treg四种辅助性T细胞亚群在MG中各自发挥的作用也有人做了相应的研究和报道，那么究竟MG的发病及进展与这四种T细胞亚群的失衡状态关系如何，以及针对这种亚群失衡的免疫调节能否起到治疗作用，相应的报道很少。因此，针对其确切发病机制以及寻求高效、特异的治疗手段的研究就显得尤为重要。 　　　　　 　　　我们分析了EAMG实验大鼠TCR BV基因mRNA的表达情况，其中，在正常对照组大鼠，没有发现BV基因取用的偏移。在EAMG模型大鼠中，表现为TCR BV10、TCR BV12、 TCR BV14、TCR BV16、TCR BV19的高表达，某一BV基因家族表达增高可出现于两种情况：特异BV T细胞数量的绝对增加或因选择激活生产更多的mRNA。虽然我们无法对这两种可能进行区分，但后一种可能得到较多证据的支持。TCR BV基因片段的广泛过度表达可以引起自身反应性T细胞的活化和浸润，而雷公藤多甙可以降低TCR BV10、TCR BV12、 TCR BV14、TCR BV16、TCR BV19表达水平，起到治疗重症肌无力的作用。本实验提示，雷公藤多甙可以通过影响TCR BV基因mRNA的表达，纠正TCR谱在外来或自身抗原的驱动下呈现的偏移，降低外周血中特异性活化的抗原反应性T细胞，从而对EAMG起到一定的疗效。

牡丹江医学院

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