1、课题来源与背景：齐齐哈尔市科技局科研指导项目 计划类别：社会发展攻关 2、目的与意义： 随着社会不断发展和生活水平的不断提高，胎儿和婴幼儿的神经发育与成长受到人们的更多关注，同时，随着社会老龄化进程的加剧，老年性痴呆的发病人数与日俱增，这一现象已引起广泛的关注，对其发病机理及其防治措施的研究已成为医学界的研究热点。本研究采用全细胞式膜片钳技术，在急性分离的大鼠大脑顶叶皮层神经元上，通过观察花生四烯酸对顶叶皮层神经元钾电流的作用以及PKC信号转导途径在此过程中的作用，探讨花生四烯酸影响感觉认知及学习记忆过程的细胞和分子机制。采用分子生物学方法，观察以上作用因素对钾通道蛋白表达的影响，以探讨AA除通过影响钾电导发挥作用外，是否通过影响钾通道的表达数量而发挥生理作用。旨在为促进胎儿和婴幼儿的神经发育与成长奠定理论基础，同时为患有Alzheimer氏病等记忆障碍性疾病的病人记忆的恢复和治疗提供有益的理论依据，为开发新药提供必要的实验室材料和线索。 3、主要论点与论据： 本课题利用急性分离的大鼠皮层神经元符合典型锥体神经元的形态，更接近体内环境，对离子通道的研究更有意义。采用全细胞式膜片钳技术检测到花生四烯酸对大鼠皮层神经元钾电流Ik有抑制作用，并呈剂量、电压依赖性，此外，利用PKC的激动剂及抑制剂进行预先干预，发现AA对大鼠皮层神经元钾电流Ik有抑制作用与PKC信号转导途径有关；运用Western-blot等分子生物学方法检测AA对急性分离的大鼠皮层神经元的KV 2.1蛋白表达的影响，此后，用PKC的激动剂及抑制剂进行预先干预，再次考察AA对此时的大鼠皮层神经元KV 2.1蛋白表达的影响，从而分析花生四烯酸对离子通道作用的可能途径和机制。这为进一步揭示AA在大脑发育及感觉认知、学习记忆过程中作用提供更有力的基础理论依据。 4、创见与创新： （1）首次利用全细胞式膜片钳技术，记录花生四烯酸可使急分离正常大鼠皮层神经元延迟整流钾电流显著下降。 （2）首次利用全细胞膜片钳技术及western blot 技术，观察到花生四烯酸对大鼠皮层神经元延迟整流钾通道存在抑制作用，PKC信号途径在此过程中发挥重要作用。 5、存在问题： （1）本次研究选用的是急性分离的大鼠皮层神经元，鼠龄为12-14天，如果能成功急性分离成年大鼠的大鼠皮层神经元进行后续实验，将可以比较花生四烯酸对不同年龄大鼠皮层神经元钾通道的影响。 （2）受资金限制，利用全细胞膜片钳记录大鼠皮层神经元延迟整流钾电流的细胞样本偏小。此外，实验中的一些分子生物学检测未能完全实施。

齐齐哈尔医学院

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