该项来源于2013年齐齐哈尔市科学计划指令性项目。研究发现, 人类的衰老和许多疾病如心肌梗死、动脉硬化、癌症、骨质疏松症和肥胖等都与人体产生的自由基有关。通过摄入具有抗氧化活性的物质可有效降低体内的自由基含量, 防止氧化反应的发生, 提高机体对疾病的抵抗能力。各类天然抗氧化剂以其低毒、高效等特点正越来越受到人们重视。目前, 已有利用乳清蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白制备抗氧化肽的报道，也有研究表明乳清蛋白水解物在铁催化卵磷脂脂质氧化体系、铜催化脂质氧化体系中具有抗氧化作用。研究从乳清蛋白的乳杆菌代谢产物中分离纯化获得乳清蛋白源生物活性多肽，研究其抗氧化性和抗肿瘤的文献国内外报导较少，本课题研究以脱盐乳清粉为主要原料，采用乳杆菌A-2进行发酵制备的代谢产物（LF），制备抗氧化、抗肿瘤产物。 技术方案：以脱盐乳清粉为主要原料，采用乳杆菌A-2进行发酵制备的代谢产物（LF），并初步探讨了LF抗氧化和抗肿瘤活性的功能。通过对发酵液的pH值、总糖和Ca2+含量的测定，筛选出最佳菌悬液浓度为1OD/mL；用ABTS法和ORAC法来测定和评价乳杆菌A-2发酵产物的抗氧化作用；采用MTT法检测LF对人舌癌细胞系Cal-27细胞增殖的影响。用SPSS 17.0 统计软件包对数据进行统计学分析。数据以x±s 表示，各均数间比较采用方差分析，P<0.05 为差异有统计学意义。 技术原理：在多肽抗氧化活性评价体系中, 基于不同自由基清除原理, 常用的抗氧化活性检测方法主要有:DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基、氮氧自由基清除能力和ABTS自由基清除能力等。其他常见的检测方法还有脂质体系的抗氧化抑制能力和还原能力法等, 一些高灵敏度的新型检测技术也被逐渐引入到抗氧化活性的检测方法中。MTT实验也被广泛用于抗肿瘤药物的筛选实验，MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶标仪在570nm 处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。 总体性能指标与国内外先进技术比较：近年来国内外对乳清蛋白及其活性肽的生物学性进行了广泛研究，越来越多的生物活性功能肽走进人们的视野, 然而与日本及欧美发达国家已有的几十年研究经验相比，我国在这方面的研究起步较晚，随着现代分离、提取、检测技术的快速发展, 对其研究必将日趋成熟和深入。乳清蛋白中潜在生物活性肽片段可以借助特定的酶或改变遗传性状的微生物释放出来, 为其进一步的开发利用奠定了基础。 目前，在食品领域使用较多的是合成抗氧化剂，合成抗氧化剂对生物体有潜在的毒副作用，同时人们随着人们环保意识的日益增加，因此，近年来寻找安全天然的抗氧化剂逐渐成为研究热点。通过本项目研究获得了1种具有较强抗氧化作用并诱导人舌癌细胞凋亡作用的的生物活性多肽。在经济效益方面，由于原料价格低廉，经过乳杆菌和双歧杆菌发酵降解，产生富含的生物活性多肽的发酵制品，提升了乳清蛋白类产品的附加值，具有巨大的经济效益。我国蛋白质功能肽的研究和开发起步较晚，生物活性多肽产业尚处于初级阶段。随着人们对营养、保健和卫生的愈加重视，对营养食品和功能性食品的需求不断增长。作为功能食品的配料之一，乳清蛋白源生物活性肽市场前景广阔，具有重要的社会效益。 本课题存在问题：目前，利用乳清蛋白资源开发具有抗氧化功能的活性肽已成为研究热点。研究表明将乳清蛋白质用适当的酶水解后，产生的蛋白肽具有一定的抗氧化活性，但是与合成抗氧化剂相比效果并不理想。因此研究乳清蛋白和乳清蛋白肽提高其抗氧化效果成为亟待解决的问题，同时，对于其机制的研究也是急需解决的问题之一。 改进意见：为了更好地推动乳清蛋白源生物活性肽应用于食品或药品的开发及商业化，在以下几方面还需进一步深入研究:①生物活性肽的构效关系和分子作用机制；②生物活性功能之间协同作用机制；③临床实验的开展及体内功效和安全性的验证；④便于大规模工业化生产的色谱技术或膜分离技术的开发及应用；⑤各种功能性食品或药品中的生物活性肽活性的快速检测方法的建立。

齐齐哈尔医学院

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