本文以消癥散结止痛贴膏为研究对象，探索其有效成分及作用机制。采用UPLC-Q-Exactive静电场轨道阱高分辨质谱联用技术，对消癥散结止痛贴膏的化学成分进行全面分析和表征，筛选有效成分；复制相关动物模型，系统评价消癥散结止痛贴膏的药效学；体内实验观察消癥散结止痛贴膏对裸鼠乳腺癌动物模型的一般状态，异体瘤体体积，抑瘤率影响，检测VEGF，Bcl，Caspase-3基因和蛋白表达，体外实验培养乳腺癌细胞系MCF-7细胞，通过检测观察本制剂体外对目的细胞系的存活率、凋亡率、VEGF，Bcl，Bax，Caspase-3基因及蛋白的改变，阐明消癥散结止痛贴膏治疗乳腺癌的机制。 研究方法 1.采用UPLC-Q-Exactive静电场轨道阱高分辨质谱联用技术，对消癥散结止痛贴膏的化学成分进行全面分析和表征，进一步筛选出含量占比高、生物活性强的成分，应用UPLC MS/MS对其化学成分进行含量测定。 2.选取4-6周雌性BALB/C-nu纯系裸鼠，在小鼠左侧第2个乳房脂肪层内接种MCF-7细胞悬液胞，建立裸鼠乳腺癌荷瘤模型，成模后随机分为模型组（A组），阳性对照组（氟尿嘧啶溶液）（B组），消癥散结止痛贴膏低剂量组（C组），消癥散结止痛贴膏中剂量组（D组）及消癥散结止痛贴膏高剂量组（E组）共五组，每组12只，模型组给予蜂蜡麻油等容积混合物，在小鼠细胞接种处皮肤局部外敷，阳性对照药组给予5-FU（腹腔注射，20mg·kg-1·3d-1），其余三组给予消癥散结止痛贴膏低中高剂量局部外敷，其中给药周期除阳性对照组外的四组每日一次，连续给药21天，阳性对照组每周一次，连续给药三周，定期观测小鼠体重，记录一般情况变化，游标卡尺测量肿瘤的长度（a）及宽度（b），计算肿瘤近似体积（V）V=1/2ab2（单位cm3）；计算各组中抑瘤率；光镜下观察荷瘤组织及肿瘤组织密度；免疫组织化学方法检测荷瘤组织汇总CD34阳性表达，并观察血管新生情况，RealTime PCR及Westernblot方法检测荷瘤组织中VEGF，Bcl-2及Caspase-3基因及蛋白表达。 3.药效学研究中，分别以建立雌二醇致大鼠及家兔乳腺增生模型，大鼠琼脂肉芽肿，电、热刺激致痛模型，血瘀型模型等，评价消癥散结止痛贴膏抑制乳腺增生，对肉芽肿重量，抗炎镇痛及对血液粘稠度影响等药效学改变。 4.体外培养乳腺癌细胞系MCF-7细胞，复苏，传代稳定后，MTT方法检测MCF-7细胞活性，检测消癥散结止痛贴膏溶液乳腺癌细胞的存活率、凋亡率，确定消癥散结止痛贴膏溶液最佳干预浓度及干预时间，以备后续实验应用。 5.将稳定传代乳腺癌细胞系MCF-7细胞分为两组，对照组和实验组，对照组不予干预，实验组给予消癥散结止痛贴膏溶液进行干预，应用RealTime PCR方法检测MCF-7细胞中VEGF，Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达。 将稳定的MCF-7细胞分为两组，对照组和实验组，对照组不予干预，实验组给予消癥散结止痛贴膏溶液进行干预，Westernblot方法检测VEGF，Bcl，Bax，Caspase-3，cleaved caspase-3蛋白的表达。

黑龙江中医药大学

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