1.主要研究内容 临床应用中大量病例表明，接骨七厘片在临床中具有明显的促进骨愈合的作用，通过本项目探讨了接骨七厘片含药血清促进骨折愈合的分子机制。 1.接骨七厘片的制备及其含药血清的制备 接骨七厘片的制备方法：由炒乳香100g炒没药100g当归150g 土鳖虫250g、烫骨碎补150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然铜100g、炒酒大黄100g最为原料制成，采用微波提取的方法制备而成，使得药效成分含量有很大的提高。 接骨七厘片含药血清的制备涉及接骨七厘片的等效剂量及不同给药量、不同给药时间、不同采血时间。通常以固定给药时间间隔，相同剂量多次重复给药，血药浓度达到稳态，仅在一定范围内波动，而在稳态情况下，不同采血时间取得的含药血清才具有相似的药理作用强度，因此任何条件的改变，都将改变获得的含药血清的质量。 2.接骨七厘片含药血清与PMSC的量效关系确定 确定接骨七厘片含药血清不同浓度对PMSC增殖的影响；确定接骨七厘片含药血清不同作用时间对PMSC增殖的影响。含药血清最佳浓度及最佳作用时间的确证，发挥含药血清对细胞的最佳药理学效应，是后续实验研究的基础保证。 3.接骨七厘片含药血清对PMSC 的Wnt/β-catenin信号通路表达的影响 （1）酶联免疫法筛选Wnt/β-catenin信号通路相关靶点，检测β-catenin、LRP 5、TCF、GSK-3β、Runx-2等靶点的表达，筛选有确切表达变化的靶点。 （2）DKK1（抑制剂）对Wnt/β-catenin信号通路表达的影响是在正向分子机制研究的基础上，利用反向思维，抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活，研究此情况下，β-catenin、LRP 5、TCF、GSK-3β、Runx-2等mRNA及蛋白表达含量的变化，并与Wnt/β-catenin信号通路的激活比较，证明接骨七厘片含药血清对PMSC 的Wnt/β-catenin信号通路具有明确的调节作用。

黑龙江中医药大学

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